生长激素释放肽ghrelin在三磷酸腺苷依赖蛋白酶介导自发糖尿病大鼠心肌保护效应中作用机制

《生长激素释放肽ghrelin在三磷酸腺苷依赖蛋白酶介导自发糖尿病大鼠心肌保护效应中作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、·中文论著摘要·生长激素释放肽Ghrelin在三磷酸腺苷依赖蛋白酶介导的自发糖尿病大鼠心肌保护效应中的作用机制刖看现有的研究提示，糖尿病心血管病并发症的发病机制可能有多种因素通过多种途径参与。糖尿病引起的内皮功能异常、胰岛素抵抗、心肌代谢异常是糖尿病心肌重构和心肌舒张功能障碍致心功能不全的始动环节。AMP依赖蛋白激酶(AMPK)，因可能通过多种途径参与保护心血管效应而受到越来越广泛的关注。目前认为AMPK是胰岛素敏感性的一种正调节因子，它不仅参与细胞内脂肪酸氧化代谢，还可通过调节GLUT4和mTOR的表达影响心肌细胞的糖代谢

2、以及蛋白质合成。近年来，Ghrelin的心脏保护作用逐渐被人们重视，尽管作用机制仍在探讨之中，但其在心血管系统的作用成为目前研究的热点。Ghrelin在体研究表明，下丘脑内注射外源性Ghrelin，可以通过激活AMPK调节机体的能量代谢；细胞水平的研究表明，Ghrelin可以通过激活AMPK改善血管内皮细胞的氧化应激。总之，越来越多的科学研究表明，Ghrelin可能与细胞代谢的关键酶AMPK有着密切的联系。本研究应用外源性的Rat．Ghrelin注射于大鼠腹腔，观察其对大鼠心脏功能、血糖血脂代谢、心脏病理结构的影响，系统评价

3、Ghrelin对自发性糖尿病人鼠的干预作用：采用分子生物学方法，观察Ghrelin对糖尿病大鼠心肌代谢关键酶AMPK以及信号转导通路下游所调控的GLUT4和mTOR表达的影响，以探讨Ghrelin确切的心血管效应及其可能的分子机制，为临床防治代谢综合征提供新的理论依据和治疗靶点。材料与方法一、实验材料SPF级12周龄雄性GK大鼠(Goto．KakisakiWistarrats)24只和SPF级12周龄雄性Wistar大鼠8只，购于上海斯莱科实验动物有限责任公司。分组干预4周后取血，并采集心肌及胸主动脉标本。GhrelinEL

4、ISA试剂盒购于南京生物技术公司；Ghrelin多克隆抗体购于博士德生物公司；Rat-Ghrelin、P．AMPK多克隆抗体、GLUT4单克隆抗体、mTOR单克隆抗体、p-actin单克隆抗体、RT-PCR试剂盒等购于上海SiroccoPharmaceutic公司．二、实验方法大鼠编号随机分为4组：Wistar组：蒸馏水灌胃4周；GK组：同等容量蒸馏水灌胃4周；二甲双胍组：二甲双胍350mg／kg／d灌胃4周；Ghrelin组：Rat-Ghrelin200肛g／kg／d腹腔注射4周。检测各组大鼠血糖、血脂、胰岛素、内皮素、一

5、氧化氮、肿瘤坏死因子．仅、Ghrelin等生化指标。12导生理记录仪测量左心室收缩压、左心室舒张末压、左心室压力最大上升速率、左心室压力最大下降速率。采用Masson特染技术以及免疫组化技术对各组大鼠心肌、胸主动脉的组织超微结构和病理学检查。Westernbolt方法检测各组大鼠心肌、胸主动脉组织mTOR蛋白、AMPK、GLUT4蛋白表达水平。RT-PCR方法检测各组大鼠心肌、胸主动脉组织mTOR蛋白、AMPK，GLUT4基因表达。三、统计学处理计量资料以均数4-标准差(X士s)表示，所有的数据均通过SPSSl3．0处理。对

6、于正态分布的变量采用方差分析进行多组间比较，方差不齐者用秩和检验，采用t检验进行两组间比较；非正态分布的变量经对数转换后采用t检验。以P0．05)；实验4周后，Ghrelin组和二甲双胍组大鼠的体重增长较GK对照组减少(P

7、lin组大鼠的Lee指数无显著性差异俨>O．05)，均明显低于GK对照组伊<0．05)。二、各组大鼠收缩压变化实验干预因素处理前，所有自发糖尿病大鼠血压均高于Wistar大鼠妒<0．05)；实验4周后，各组大鼠收缩压水平无显著变(P>O．05)化；Ghrelin组和二甲双胍组收缩压仍显著高于Wistar大鼠，较GK组的收缩压水平略低，但差异不显著(尸>0．05)。三、各组大鼠糖脂代谢相关指标的比较实验干预因素处理4周后，GK组大鼠的HW／BW、FBG、FINS、HOMA．IR、TC、TG、LDL-C、TNF-a明显高于另外三

8、组(P<0．05)；Ghrelin组的上述指标均明显低于GK组(尸<0．05)；二甲双胍组HW／BW、FBG、FINS、HOMA．IR、TC、TG、TNF．a明显低于GK组(P<0．05)，但LDL．C与GK组差异不显著俨>O．05)。四、各组大鼠内皮功能相关指标的比较GK组大鼠血浆ET．