可口革囊星虫血细胞分类和单克隆抗体制备

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1、可口革囊星虫血细胞的分类和单克隆抗体的制备捅要本文分别采用密度梯度离心、荧光显微镜观察、瑞氏染色和透射电镜观察等四种方法对可口革囊星虫的血细胞进行分类，将其分为两类：透明细胞和颗粒细胞，其中颗粒细胞又分为两个亚型：大颗粒细胞和小颗粒细胞。经密度梯度离心，血细胞在淋巴细胞分离液中被分为两层，透明细胞主要位于上层，颗粒细胞则大部分位于下层。在荧光显微镜下可观察到血细胞的自发荧光，在不同波长下透明细胞与颗粒细胞产生的自发荧光不同。利用瑞氏染色法光镜下观察，透明细胞大多数为圆形或椭圆形，细胞质透明或淡紫色，

2、细胞表面光滑无胞突，胞质稀少，细胞质内无明显颗粒，核质比小。细胞核为粉色，核中含有深色的致密物质。小颗粒细胞比透明细胞小，细胞质呈黄色或棕黄色，并且其中含有很多黑色颗粒，细胞核呈粉色圆形，核质比大。大颗粒细胞数目最少，胞质中充满了大的紫黑色的致密颗粒，细胞核粉紫色。透射电镜下观察，透明细胞几乎不含细胞器，核内常染色质丰富。小颗粒细胞的细胞质中有粗面内质网、高尔基体、线粒体等许多的细胞器，还含有电子致密颗粒，有伪足。大颗粒细胞中充满了电子致密颗粒。以可口革囊星虫的血细胞作为抗原免疫Balb／C小鼠，取

3、其脾脏，聚乙二醇为融合剂，将免疫小鼠的脾细胞和Sp2／O小鼠骨髓瘤细胞融合，用Gibco公司的RPMI—1640培养基培养杂交瘤细胞。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测杂交瘤上清液，检测得到大量阳性杂交瘤细胞，最终得到8株具有较高分泌能力的杂交瘤细胞冻存备用。有限稀释法克隆了8株阳性杂交瘤细胞，通过密度梯度离心分离血细胞与ELISA检测相结合，发现：单抗EB3与颗粒细胞发生阳性反应，单抗DDl、EDl与透明细胞发生阳性反应；应用免疫磁珠与可口革囊星虫的体腔细胞的反应，发现单抗DDl与透明细胞细胞

4、膜发生阳性反应；单抗EB3与颗粒细胞细胞膜发生阳性反应。总而言之，单抗EB3似乎是非常有希望用于鉴别和区分颗粒细胞，并且这三株单克隆抗体将被用于关于细胞的防御机制的进一步研究中。关键词：可口革囊星虫、血细胞、形态结构、分类、单克隆抗体可口革囊星虫血细胞的分类和单克隆抗体的制备AbstractFourmethodswereusedtoclassifythehemocyteofPhascolosomaesculenta，whicharedensitygradientcentrifugation，stai

5、nedbytheWright’sandObservedbyfluorescentmicroscopeandelectronmicroscope．Thetwotypehemocytescanbeseparatedbydensitygradientcentrifugation，withthehyalinocytesandgranulocytcsmainlyaboveandbelowtheinterface．Underfluorescentmicroscope，haemocyteswereclassifi

6、edintohyalinocyteandgranulocyte，accordingtheauto—fluorescenceofhemocytes．SmearswerestainedbytheWright’sandthenobservedunderthelightmicroscope．Hyalinocyteswerestainedlightpurple．Theydonotcontaincharacteristicgranules．Amonggranulocytestwosubtypeswerefurt

7、herdistinguished：thesmailgranularcellswassmallerthanhyalinocytcsandcontainnumerousgranulesincytoplasm，Thebiggranularcellsarefilledwithveryobviouslargegranules．Thegranuleswerestainedpurple．Observedattheulttastructurallevelbyelectronmicroscope，hyalinocyt

8、eswereagranularandshowedroundishnucleussurroundedbyrelativelysmallcytoplasm．Organellesaresparse．Comparedwithhyalinocytes，granuiocytespossessrelativelymoregranulesandorganellesintheircytoplasm．Twotypesofgraaulocytescanberecognized．Smallg