线粒体dna-sscp分型和snp+rs220028和strhumara位点甲基化标记法医学应用

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1、华中科技大学同济医学院英文缩略词注解STRm伍)NAHV二I、IIPCRSSCPPAGAcrBisAPSTEN砸DEDTASDSDTTDⅣⅢ砥m压ARAMSRESSNP第1页短串联重复序列线粒体DNA高变区I、II聚合酶链式反应单链构象多态性聚丙烯酰胺凝胶丙烯酰胺亚甲基双丙烯酰胺过硫酸铵四甲基乙二胺乙二胺四乙酸十二烷基磺酸钠二硫苏糖醇差异甲基化区人类雄激素受体基因甲基化敏感性限制酶单核苷酸多态性华中科技大学同济医学院硕士学位论文第一部分SSCP法mtDNA分型的法医学应用硕士研究生导师艾红伟余纯应教授华中科技大学同济医学院法医学

2、系法医物证教研室摘要目的：探讨线粒体DNA(mitochondrialDNA，mtDNA)的单链构象多态性(singlestrandconformationpolymorphism，SSCP)分型在法医学鉴定实践中的意义。方法：利用新设计的引物，PCR扩增出mtDNA的HV-I和HV-II的DNA序列片段，扩增产物中加入SSCP载样缓冲液，在4℃非变性条件下PAG电泳分离，得到SSCP图谱。调查70个湖北汉族真三联家系和140例随机个体。通过比较真三联家系中mtDNA的单倍型SSCP图谱和对140例随机个体的HV-I、HV-II

3、的SSCP图谱进行统计，分析两个高变区在母系家系确定、个人识别中的意义和鉴别能力。结果：在70个湖北汉族真三联家系中，母亲和孩子的HV-I、HV-IISSCP图谱带型完全相同：家系中父亲与母子的HV-I图谱不同占98．57％；家系中父亲与母子的HV-IISSCP图谱不同占97．13％。140例随机个体的HV-I、HV-II区的SSCP图谱分别检出21、16种单倍型，GD值分别为O．9556、0．9356。结论：mtDNA．SSCP分型在嫌疑人筛查和母系亲缘关系推断中有实际应用价值。关键词：线粒体DNA；单链构象多态性；个人识别；

4、母系家系第2页华中科技大学同济医学院硕士学位论文ApplicationofPCR-SSCPinforensicmtDNAtypingM．D．StudentAiHong-weiSupervisorProfYuChun-yingAbsractObjective：TostudytheapplicationofPCR-SSCPinforensicmtDNAtyping．Method：PrimersflankingthemtDNAHV-IandHV-IIregionsweredesigned．ByPCR-SSCPtechniques，70

5、familytriosand140unrelatedWuhanHanindividualswereinvestigatedandanalyzed．Results：In70familytrios，SSCPprofilesofchildrenweresameto坊atoftheirmothers．In140unrelated呦anHanindividuals，21haplotypeswerefoundinHV-I，GD20．9556，P=0．0512；16haplotypeswerefoundinHV-II，GD=0．9356，P=

6、0．0711．Conclusion：PCR-SSCPtechniquemaybeusefulinforensicmtDNAtyping，espicallyforscreeningthesuspects．Keywords：mtDNA；SSCP；Personalidentification；Matemalgenealogy第3页华中科技大学同济医学院硕士学位论文SSCP法mtDNA分型的法医学应用刖吾人类线粒体DNA(mitochondrialDNA，mONA)长16569bp，为闭合环状分子，是核外遗传物质。mONA由保守的编码区

7、和高度变异的非编码控制区组成。编码区编码氧化呼吸链酶有关的蛋白亚单位，非编码区又称控$iJI又"(controlregion，CR)，长1122bp，包括复制转录起始部位和D环。控制区含有三个高变区HV-I(hypervariableregionI15996～1640Int)、HV-II(hypervariableregionII，29～408nt)、HV-IH0aypervariableregionIII，438—574n0。mtDNA具有以下特点：1、进化速率快，序列变异大，比核DNA基因组进化快6-17倍。2、拷贝数多。一

8、个体细胞含有数百数千拷贝，因此PCR检测灵敏度高，更适于微量和无核检材鉴定。例如毛干、指甲、残骨等无核生物检材的检验鉴定。3、母系遗传，凡由一个母系繁衍下来的后代，mtDNA序列一致fl。51。上述特征使mONA成为重要的法医学应用遗传标记系统。目前mtDNA分