水稻pip2-1基因在rsv浸染过程中的功能研究

《水稻pip2-1基因在rsv浸染过程中的功能研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ADissertationfortheDegreeofMasterFunctionsofPip2-1geneofriceintheprocessofRSVinfectionByZhouHongSupervisedbyAacdemicianChenJianpingandAssociateProfessorYanFeiAnhuiAgriculturalUniversityHefei230036,P.R.ChinaJune,2013摘要真核翻译起始因子是参与蛋白质翻译起始过程的一种重要蛋白质，在整个蛋白质翻译起始过程中起着关键性作用，保证蛋白质翻译的正常进行。目前，有大量研

2、究表明，翻译起始因子除参与植物体蛋白质翻译起始过程外，同时还参与植物的抗病性。真核翻译起始因子具有一个庞大的家族体系，本研究中的Pip2-1蛋白就是该家族成员之一，本研究通过酵母双杂交及双分子荧光互补实验表明该蛋白与RSVP2蛋白具有互作关系，同时荧光定位分析表明该蛋白定位于本氏烟的细胞膜上。利用病毒诱导基因沉默(virus-inducedgenesilence，VIGS)技术来诱导植物体中Pip2-1基因沉默后，植株表现出矮化，叶片畸型，开花异常，结实率低等表型，表明Pip2-1基因在植物生长发育过程中不可或缺。实时荧光定量分析结果表明Pip2-1蛋白在带RSV烟草

3、与水稻中的表达量下调，寄主蛋白Pip2-1在RSV侵染过程可能具有一定的生物学功能，本研究为RSV侵染机制以及寄主的感病与抗病机制提供一定线索。为进一步研究Pip2-1基因在本氏烟及水稻生长发育过程中的重要功能及其与病毒侵染循环之间的关系，本研究从本氏烟及水稻基因组中扩增克隆出的NbPip2-1及OsPip2-1基因，并构建成NbPip2-1及OsPip2-1超表达和抑制表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化获得转基因烟草及水稻，Real-timePCR、Western-blot检测结果表明所转目的基因已成功整合到转基因水稻的基因组中并得到有效表达。这为后期转基因苗的表型

4、分析、功能鉴定以及抗性研究打下了重要基础。关键词：真核翻译起始因子，病毒侵染，RSV，VIGS，转基因IAbstractEukaryotictranslationinitiationfactorisakindofimportantproteinsinvolvedinproteintranslationinitiationprocess.Itplayskeyrolesinthewholeproteinstranslationprocess.Alargenumberofstudieshaveshownthatmanytranslationinitiationfactors

5、arealsoinvolvedintheplantresistancepathway,besidesproteintranslationinitiationprocess.Eukaryotictranslationinitiationfactorhasalargeproteinfamily.ThePip2-1proteininthisstudyisoneofthefamilymembers.Inthiswork,weidentifiedinteractionbetweenPip2-1proteinandRSVP2proteinthroughtheYeasttwohyb

6、ridandBimolecularfluorescencecomplementationexperiments.Subcellularlocalizationanalysisshowedthattheproteinlocatesonthecellmembrane.Whenweusedvirusinducedgenesilencing(VIGS)techniquetoinducePip2-1genesilencinginplant.Plantsshoweddwarf,leafmalformation,blossomanomaliesandlowseedsettingra

7、te,whichindicatedthatPip2-1genewasessentialintheprocessofplantgrowthanddevelopment.TheresultsofReal-timePCRshowedthatthePip2-1geneexpressionlevelwasdown-regulatedinRSVinfectedtobaccoandriceplant,indicatingthatPip2-1mighthavecertainbiologicalfunctionintheprocessofRSVinfection.Th