caco3对青枯病菌生长影响及土壤中青枯病菌定量pcr分析

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1、摘要CaC03对青枯病菌生长的影响及土壤中青枯病菌定量PCR分析微生物学专业硕士研究生：李洪指导教师：李振轮副教授(摘要)烟草青枯病是由青枯菌砌氐fD，lJ【口sD肠一口ce口删m引起的毁灭性土传病害，对烟草质量和产量影响较大，其防治非常困难。因此，本文主要从药敏试验，无机盐碳酸钙及氯化钙对青枯菌的影响和定量检测土壤青枯菌方面进行研究，探讨最佳药效药物，碳酸钙、氯化钙与青枯菌的关系及该菌在土壤中的定量PCR分析，为深入了解青枯菌在土壤中的发生机制及防治提供理论依据。实验结果如下：半选择培养基(PCCG)和聚合酶链式反应(PCR

2、)技术的结合以分离源自四川省达州市白肋烟茎秆中的青枯菌，并对其生化型做出鉴定，结果分离得到23株青枯菌，均为生化III型。然后分别用叶枯唑，乙蒜素，农用硫酸链霉素，石硫合剂，47％聚赖氨酸，99％曲酸处理该病菌，并建立对照，研究烟草青枯病菌对几种杀菌剂的敏感性，筛选出性能优良的适用药剂。结果表明：所分离菌株对乙蒜素，农用硫酸链霉素，叶枯唑敏感，其中乙蒜素效果最好，对烟草青枯病菌有良好的防治效果。实验室通过接种青枯菌于21个含有不同粒径和不同比例碳酸钙的土壤样品及体外研究pH，Ca2+对青枯菌生长的影响，结果表明青枯菌最适生长p

3、H为6．O，当pH超过8时青枯菌几乎不能生长，且Ca2+对青枯菌的生长有一定的抑制作用，抑制率可达到78．17％。碳酸钙与青枯菌生长量密切相关，碳酸钙粒径大小与青枯菌生长量呈正相关，合适粒径的碳酸钙能使土壤pH增加到8．O和提高土壤中交换性钙离子浓度，而pH的增大和钙浓度的增大是抑制青枯菌生长的主要原因，最适碳酸钙粒径应小于l嗍。对青枯菌在不同浓度的氯化钙作用下所产果胶酶活性测试，结果表明产胞外果胶酶活性与所加氯化钙浓度成反比。经方差分析，外源钙与青枯菌产胞外果胶酶活性呈显著负相关(F>F嘶t)。对青枯菌在不同浓度的氯化钙作用

4、下所产胞外多糖测试，结果表明氯化钙对青枯菌所产胞外多糖总量和单产量影响甚小。所有处理与对照相比无显著差别。西南大学硕士学伊论文为实现田间土壤烟草青枯菌的早期检测，建立了土壤中烟草青枯病菌的sYBRG赋nI荧光定量PCR检测方法。以含331bp序列的重组质粒为荧光定量PCR的标准品，构建定量标准曲线，对种植烟草的不同层次土壤检测青枯菌数量。结果表明，青枯菌检测范围在4．16×103—4．16×108copies／止之间有良好的线性关系，相关系数R2为o．99l，扩增效率为110％，且在种植烟草大田中，发病植株根际土壤青枯菌量大于

5、其它土壤层次中的含菌量，轮作玉米土壤中非根际青枯菌量大于根际土壤中菌量。Ⅱ关键词：烟草青枯病菌定量分析钙果胶酶多糖AbsIracCEfkctofCalciumCarbonateonGrowthof尺以瓜fD耽f以sD励耽口ce以厂M7"andDetectionof尺口厶幻耽砌sD励刀口ce口儿zminSoilwithReal．timePCRAssayApplicanforMasterDegree：LIHongSupervisor：PrOf．AssociateLIZhenlunAbstI．actTobaccobacterial、

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