无患子乙醇提取物抗非酒精性脂肪肝的实验研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文无患子乙醇提取物抗非酒精性脂肪肝的实验研究TheStudyofSapindusAlcoholicExtractonNon-alcoholicFattyLiverDiseaseinRats课题来源：国家自然科学基金资助项目(No．30901947)中国博士后科学基金特别资助项目(No．201003783)教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No．20104433120002)学位申请人张勤导师姓名莫志贤教授专培业养蔡红兵副研究员名称中药学类型学术型培养层次硕士研究生所在学院中医药学院2013年4月5日

2、广州硕士学位论文l』IIIII111111111IIlY2406169无患子乙醇提取物抗非酒精性脂肪肝的实验研究硕士研究生：张勤指导教师：莫志贤教授蔡红兵副研究员摘要研究背景肝脏是机体新陈代谢的重要器官，脂肪性肝病(Fattyliverdisease)是指脂肪(主要是甘油三酯TG)在肝脏过度沉积的临床病理综合症，其病理表现为单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬化。肝有门静脉和肝动脉双重血供，但两者最终都是通过终末微静脉和微动脉与肝血窦相连，完成与肝细胞的物质交换后汇集于肝静脉，因此肝窦是完成肝脏物质交换的主要场所。而肝窦内皮

3、细胞(LiversinusoidalendothelialcellLSEC)与肝枯否(kupffer)细胞是主要的肝窦状隙细胞，且与肝内物质代谢及肝脏生理病理变化密切相关。LSEC受损，窗孔调节失控，如持续或过度扩张可使原不能通过的富含甘油三酯的乳糜微粒(CM)被肝细胞摄取造成脂质在肝细胞的堆积，引起急性脂肪肝。无患子(SapindusmukorossiGaertn)为无患子科无患子属的一种落叶大乔木，其果实又名肥皂树、洗手果或圆肥皂等，分布于我国长江流域以南地区及台湾省，日本、朝鲜、中南半岛和印度等地也常栽培。无患子味苦，性寒，有小

4、毒；具有清热祛痰、消积杀虫之功效。近年来，随着对无患子研究的深入，其化学成分及其药理作用已逐渐被发现，'-3I起人们越来越多的关注。无患子作为中药材在我国有悠久的使用历史。据考证，无患子始载于《本摘要草拾遗》，《植物名实图考》亦有附图，关于其药用价值早在《本草纲目》中就有记载。现代药理基础研究发现，无患子具有多种生理活性和药用价值，主要包括抗肿瘤、降压、抗菌、抗炎等，有报道表明无患子皂苷对高脂血症大鼠血脂代谢有’一定调节作用，但对无患子防治脂肪肝方面的研究尚未见报道。本研究的预实验结果表明，无患子粗提物对大鼠脂肪肝的形成具有一定的干预

5、作用。在此基础上，本课题拟对无患子乙醇提取物的抗非酒精性脂肪肝作用进行深入研究。本研究拟通过大鼠体内实验检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性、甘油三酯(TG)、总胆固醇(Tc)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、丫．谷氨酰转肽酶(1，一GT)、碱性磷酸酶(ALP)、脂联素(APN)含量等指标的变化，以及运用扫描电镜和透射电镜技术观察正常和脂肪肝动物肝窦状隙细胞(LSEC)及kupffer细胞形态、数量及功能的变化，探讨分析肝窦状隙细胞(LSEC)的变化与相关酶类和细胞因子表达的改变在脂肪肝发病过程中的

6、相关性，并给予中药无患子进行干预，进一步探寻脂肪肝的发病机制及药物作用靶点，为脂肪肝的防治提供新的思路与方法。研究目的1、对无患子入药部位——无患子果皮进行性状和显微鉴定，认清无患子有效成分的物质结构基础，为下一步筛选该药活性成分(部位)提供理论依据。2、通过急性毒性实验，测定本课题所使用的无患子乙醇提取物对小鼠的半数致死量(LD50)，以保证实验用药过程的安全性和有效性。3、通过检测实验动物血清中转氨酶、脂蛋白等生化指标，以及观察实验动物肝脏细胞、LSEC窗孔、kupffer细胞等与脂肪肝相关的细胞因子的变化，初步探讨这些酶类、细胞

7、因子与肝窦状隙细胞在脂肪肝发病过程中的相关性。4、采用药物无患子醇提物进行干预，验证其调节血脂、保肝护肝的疗效，为进一步探寻脂肪肝发病机制，寻找药物作用靶点提供参考资料。Il硕士学位论文实验方法1、制作药材显微制片①永久制片：无患子干燥果皮，片。②粉末装片：无患子干燥果皮，水合氯醛透化装片。2、药物提取液制备按常规石蜡切片，番红．固绿染色，中性树胶封65℃烘干1．5h，粉碎后，取粉末制作水装片和取无患子果皮，干燥粉碎后，第一次先用4倍量85％乙醇浸泡30min，90℃回流提取2h，收集提取液；第二次再用3倍量85％乙醇回流提取1．5h

8、，两次提取液过滤后合并，浓缩至lglml，于46C保存备用。3、急性毒性实验将KM小鼠60只，随机分为6组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养，先适应性喂养1周。按小鼠急性毒性实验常规方法，给药前禁食不禁水12h，第1组至第