甲状腺素受体介导甲状腺素调控牙鲆变态的研究

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1、学校代码：10264研究生学号：D140103012上海海洋大学博士学位论文甲状腺素受体介导甲状腺素调控牙题目：鲆变态的研究Analysisofthyroidhormonereceptor英文题目：mediatingthyroidhormoneregulationofmetamorphosisinJapaneseflounder(Paralichthysolivaceus)专业：生物学研究方向：鱼类发育生物学姓名：喻杰指导教师：施志仪教授二O一八年5月23日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指

2、导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海水产大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用

3、本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学博士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注罗祖玉复旦大学教授主席吴超群复旦大学教授委员李名友上海海洋大学教授委员张俊玲上海海洋大学副教授委员李文娟上海海洋大学副教授委员付元帅上海海洋大学副教授秘书答辩地点水产与生命学院C楼217答辩日期2018.05.23上海海洋大学博士论文甲状腺素受体介导甲状腺素调控牙鲆变态的研究摘要甲状腺素（thyroidhormone，TH）是一类氨基酸衍生物，在个体发育、维持内环境稳定、细胞增殖和分化等方面均有广泛的作用。牙鲆（Pa

4、ralichthysolivaceus）在我国是一种重要的海洋经济养殖鱼类，其从仔鱼到稚鱼的转变中经历一个剧烈的变态发育过程，伴随着身体对称性的失去和眼睛的移位等等，该过程受甲状腺素的调控。业已证实，甲状腺素通过甲状腺素受体（thyroidhormonereceptor，TR）诱导加速牙鲆仔鱼的变态。但到目前为止，关于甲状腺素调控仔鱼变态的机制知之甚少。本文从三个方面展开研究，主要结果如下：1、牙鲆变态过程中甲状腺素受体和脱碘酶表达的关系为研究外源性TH对牙鲆变态期间脱碘酶和甲状腺素受体的影响，笔者将15dph（15daysposthatch，出膜后15天）的仔鱼

5、随机分成3组：正常对照组（normalcontrol，NC）、TH处理组和TU（thiourea，硫脲）处理组，饲养直至41dph。为了评估用TU处理的牙鲆是否可以通过外源性TH来拯救其变态，笔者在35dph（NC组牙鲆已经完成变态）时设计了拯救实验，将TU组的幼体分成3组：TU组继续在含硫脲的海水中饲养，TU+NC组转入天然海水中饲养，TU+TH组转入含有外源性甲状腺素的海水中饲养。利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测了3个甲状腺素受体TRαA、TRαB、TRβ和3个脱I上海海洋大学博士论文碘酶（deiodinases，Ds）D1、D2、D3基因mRNA

6、在各实验组各时期的表达情况，利用酶联免疫吸附实验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）检测了各实验组各时期牙鲆幼体体内甲状腺素T4和T3的总体水平。结果显示：随着牙鲆幼体开始进入变态进程（16-21dph），D1、D2、TRαA、TRαB和TRβ的表达开始增加，体内甲状腺素水平亦如此；本试验中除去D3以外其他所有分析的对象，均在变态高峰期（25-31dph）出现峰值水平，此后表达水平全部以相似的趋势下降直到变态结束（35-41dph）。不同的是，变态后TRβ转录水平仍然很高。D3表现出不规则的波浪状表达变化趋势，这与变态过程中

7、分析的其他对象不同。外源TH处理显著促进了牙鲆幼体的变态。ELISA实验结果显示，外源TH处理在变态早期增加了牙鲆体内的TH水平，但在之后没有明显效果。qRT-PCR显示D1的表达在整个变态过程中被外源TH处理下调。D2、TRαA和TRαB在变态早期被TH处理上调，随后被下调。在变态早期和高峰期，TH处理上调了D3和TRβ的表达。与TH处理相反，TU处理抑制了牙鲆幼体的变态。本研究结果表明，TU处理在整个变态过程中都降低了牙鲆体内的TH水平。D1在变态高峰期和变态后期受到外源TU处理的上调；D2和TRαB在高峰期被下调，高峰期后被上调；D3和TRβ在高峰期和变态后

8、期被TU处