副溶血性弧菌和霍乱弧菌混合生物被膜的形成

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1、学校代码：10264研究生学号：M150208367上海海洋大学硕士学位论文题目：副溶血性弧菌和霍乱弧菌混合生物被膜的形成FormationofmixedbiofilmsofVibrio英文题目：parahaemolyticusandVibriocholerae专业：食品科学与工程研究方向：食品安全风险评估及品质控制姓名：董旭日指导教师：赵勇教授二O一八年四月二日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，

2、本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者

3、签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注主席委员委员委员委员委员委员秘书答辩地点答辩日期副溶血性弧菌和霍乱弧菌混合生物被膜的形成摘要：细菌生物被膜（BacterialBiofilm）是许多细菌粘附在生物或非生物表面后，分泌胞外多糖（EPS）、蛋白质、脂质和DNA等复合物，并将细菌包裹其中而形成的膜状物，是细菌为了适应自然环境、利于自身生存的一种存在形态。自然界中的细菌大多能形成生物被膜，形成的生物被膜以混合生物被膜状态存在。副溶血性弧菌（Vibrioparahaemolyt

4、icus，VP）和霍乱弧菌（Vibriocholera，VC）是海产品中的重要食源性致病菌，。副溶血性弧菌和霍乱弧菌常常在水产品中共存，并能在水产品表面形成混合生物被膜，容易引起食品交叉污染，导致食品腐败或疾病传播的隐患，给食品安全带来极大威胁。因此研究副溶血性弧菌和霍乱弧菌形成的混合生物被膜，对食品中的有害生物被膜的控制具有重大意义。本研究以VC菌和VP菌为研究对象，首先，研究单培养VC菌、VP菌和混合菌生物被膜的形成过程，分别在4、8、12、24、36、48、60、72h测量生物被膜的形成；其次，研o究了不同温度（4、15、25、37

5、C）和不同盐度(1、2、3、4、5、6、7%)条件下单培养VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成；最后通过荧光定量PCR、荧光原位杂交研究电解水处理对单培养VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成的影响，为有效控制VC菌、VP菌形成的混合生物被膜提供基础。1.副溶血性弧菌-霍乱弧菌混合生物被膜形成过程的研究在4h、8h、12h、24h、36h、48h、60h、72h测定单独条件下VP、VC及其混合后生物被膜的形成情况，通过结晶紫染色法、平板菌落计数法、测定胞外多糖、胞外蛋白，通过激光共聚焦显微镜（CLSM）观察单培养及混合条件下生物被膜的形成。

6、虽然形成的混合生物被膜量介于VC和VP之间，但混合生物被膜在形成过程中，成熟期后生物被膜量的变化较小，对环境的抗性增强。混合生物被膜中拥有更多的活菌，混合生物被膜形成过程中胞外蛋白和胞外多糖的变化体现出其可能在对抵御逐渐不适应环境中起重要作用。VC与VP共同形成生物被膜的过程中，混合生物被膜总量虽然减少，但混合生物被膜中拥有更多的活菌，这可能引起更大的危害。混合生物被膜混合生物被膜形成过程中被膜的变化，可为有害生物被膜的控制提供基础。2.环境因素对副溶血性弧菌和霍乱弧菌生物被膜形成的影响o通过研究不同温度（4、15、25、37C）和不同盐

7、度(1、2、3、4、5、6、7%)条件下单o培养VC菌、VP菌和混合菌的生物被膜形成。结果表明，混合生物被膜在37C条件下生物被膜的形成能力和生物被膜中的活菌数比单培养的VC菌和VP菌更多。在5%的盐度条件下混合菌形成的生物被膜同单培养的VC菌和VP菌相比，表现出了对高盐度的较强的抗1性。混合生物被膜不仅生物被膜量更多，而且拥有更多的活菌。3.副溶血性弧菌-霍乱弧菌混合生物被膜的清除通过荧光定量PCR和荧光原位杂交（FISH）技术，研究电解水处理对单培养VC菌、VP菌及混合菌形成的生物被膜的影响。结果表明，同单培养的生物被膜相比，混合生物

8、被膜对电解水的处理表现出了较强的抵抗力。荧光定量PCR的结果表明了混合生物被膜同单培养的生物被膜相比，在经过电解水处理后，混合生物被膜中细菌总量减少较少，未像单培养的VC菌和VP菌那样表现出显