花生网斑病菌鉴定及其诱导下花生转录组学研究

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1、分类号密级UDC单位代码硕士学位论文花生网斑病菌鉴定及其诱导下花生转录组学研究PathogenicIdentificationofPeanutWebBlotchandStudiesonTranscriptomicsofPeanutInducedbyPhomaarachidicola研究生姓名吕宾指导教师鄢洪海教授学科专业植物病理学研究方向植物病理生理中国.青岛二零一八年六月PathogenicIdentificationofPeanutWebBlotchandStudiesonTranscriptomicsofPeanutI

2、nducedbyPhomaarachidicolaThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyLvBin（DepartmentofAgronomy）Supervisor:YanHonghaiQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论

3、文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月

4、日青岛农业大学硕士学位论文摘要花生网斑病菌鉴定及其诱导下花生转录组学研究摘要花生（ArachishypogaeaL.）是世界上最重要的油料作物之一，因其对环境要求较低，种植适应性强，而在世界各地广泛种植。中国是世界上最大的花生生产国、消费国和出口国。近年来，由花生茎点霉（PhomaarachidicolaMarasasPauer&Boerema）引起的花生网斑病为害日益严重。从分子水平研究花生响应网斑病菌侵染的机制，对花生选育优良品系具有重要意义。目前，关于花生网斑病的研究主要集中在病原菌的鉴定及其生物学特性、发生流行条件等

5、方面，而在转录组水平关于花生网斑病的研究鲜有报道。本研究采用形态学结合分子生物学对采集到的花生网斑病菌进行鉴定，及其致病性检测；以前期鉴定出的强致病力菌株及接种方法为基础，以接种网斑病后不同时间段的花生叶片为材料，对其转录组进行测序分析，通过比对分析网斑病菌胁迫下的差异基因表达情况，找到响应网斑病菌胁迫的关键基因，并对其进行功能注释和代谢途径分析。研究结果如下：（1）从山东、云南、沈阳等花生产区采集分离共得到9个菌株（编号为WB-LX、WB-PD、WB-SY、WB-YN1、WB-YN2、WB-YN3、WB-BS、WB-YM、

6、WB-3），通过形态学特征观察并结合分子生物学鉴定得到WB-LX、WB-PD、WB-SY、WB-YN1、WB-YN2五个菌株为花生茎点霉（PhomaarachidicolaMarasasPauer&Boerema）。（2）通过离体叶片接种法对网斑病菌的接种条件进行初探并筛选出致病力较强的菌株，作为下一步活体植株接种的菌株。筛选得到5个菌株具有致病性，致病力依次为WB-SY＞WB-LX＞WB-PD＞WB-YN2＞WB-YN1。致病力最强的菌株WB-SY于近紫光条件下接种7d后叶片发病。同时研究发现近紫光可显著促进植株发病。通过

7、活体植株接种筛选出一种快速有效的接种方法：在花生开花末期使用高浓度孢子悬浮液（106个/ml），接种湿度保持在90-100%之间持续保湿36h以上，温度在25-28℃之间，同时黑暗处理24h利于发病。（3）采用RNA-Seq技术，对接种网斑病后7d、14d和27d的花生叶片转录组进行高通量测序，将测序结果与两个野生型花生基因组Arachisduranensis（A）和Arachisipaensis（B）为参考进行比对，分析筛选差异表达基因，并对其进行GO和Pathway富集分析。结果表明，①对网斑病菌诱导下花生差异表达基因进

8、行统计，同时以A、B两个基因组为参考序列比对分析差异表达基因。以A为参考序列时，接菌7d、14d、27d相比对照差异表达基因总量分别为766个、3248个、1960个，其中连续差异表达的基因I青岛农业大学硕士学位论文摘要有126个；以B为参考序列时，接菌7d、14d、27d相比对照差异表达