山东海水养殖鱼类杀鲑气单胞菌的鉴定、分型和耐药性检测

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1、分类号密级UDC单位代码硕士专业学位论文山东海水养殖鱼类杀鲑气单胞菌的鉴定、分型和耐药性检测Identification,genetypingandantibioticsresistanceofAeromonassalmonicidaisolatedfrommarinefarmingfishesinShandongprovince研究生姓名刘耀宽指导教师王文琪教授第二导师莫照兰研究员学位种类农业硕士专业领域渔业中国青岛二0一八年六月QingdaoAgriculturalUniversityTheThesisof

2、ProfessionalMasterIdentification,genetypingandantibioticsresistanceofAeromonassalmonicidaisolatedfrommarinefarmingfishesinShandongprovinceLiuyaokuanMentor:WangwenqiSecondMentor:MozhaolanTypeofProfessionalDegree：MasterofAgriculturalAcademicfield：FisheryQingda

3、o.ChinaJune.2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，

4、可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士专业学位论文摘要山东海水养殖鱼类杀鲑气单胞菌的鉴定、分型和耐药性检测摘要杀鲑气单胞菌是养殖鱼类的重要致病菌，可以引起鱼类皮肤脓肿、溃烂等疥疮病症状。在我国多种养殖鱼类中均有杀鲑气单胞菌感染的报道。近年来，本实验室在山东地区的养殖半滑舌鳎、大菱鲆、大西洋鲑等养殖鱼类中多次发现杀鲑气单胞

5、菌感染的病例。本研究将本实验室近几年来分离和收集自山东沿海地区的杀鲑气单胞菌临床菌株进行了生理生化鉴定、抗生素敏感性检测、人工感染实验及16SrDNA、gyrB、recA、dnaJ、rpoD和vapA等基因的序列分析和分型。为后期有针对性的治疗和预防杀鲑气单胞菌病提供了参考。主要研究内容如下：1、半滑舌鳎腹水病病原菌的分离鉴定。从山东潍坊昌邑地区一养殖场患腹水、脱肛症状的养殖半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevls)内脏分离纯化到菌落形态一致的优势菌株，命名为CS-1，经过生理生化鉴定以及gyrB、

6、recA、dnaJ、rpoD、16SrDNA和vapA等基因的序列比对和系统发育进化树分析，确定该病原菌为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种，人工感染实验确定CS-1对半滑舌鳎具有较强的致病性，其半数致死量(50%lethaldose，LD550)为1.24×10CFU/尾。人工感染的半滑舌鳎出现的症状与自然发病一致，确定分离株CS-1为引起此次半滑舌鳎病症的致病菌。药物敏感性实验结果显示，CS-1对青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素等11种抗生素具有耐药性，对阿莫西林、头孢噻吩、大观霉素、利福平等16种抗生素敏感。2、杀

7、鲑气单胞菌临床分离株的流行病学调查。针对实验室近年来分离自烟台、日照、潍坊等山东沿海地区的大菱鲆、大西洋鲑、裸盖鱼等海水养殖鱼类临床分离的杀鲑气单胞菌。利用Biolog系统对其生理生化特征进行检测。生理生化结果显示，所有临床分离菌株对糊精、D-麦芽糖、D-海藻糖、D-纤维二糖等10种底物呈阳性反应，对p-羟基-苯乙酸、D-苹果酸、丁酸钠、溴酸钠等7种底物呈阴性反应，其他的底物反应有所区别。表明分离的杀鲑气单胞菌菌株生理生化性状具有多样性。根据系统判定结果均为杀鲑气单胞菌，但未能将菌株精确到亚种。药物敏感性结果显

8、示，所有菌株对苯唑西林、林可霉素、泰洛星、甲硝唑四种抗生素都有耐药性，超过80%的菌株对青霉素、阿莫西林、红霉素等10种抗生素具有耐药性。并且所有菌株均敏感的药物只有安普霉素和呋喃妥因两种。上1青岛农业大学硕士专业学位论文摘要述研究结果表明杀鲑气单胞菌具有广泛的耐药性，在应对杀鲑气单胞菌的感染中，抗生素的使用具有一定的局限性。对临床分离菌株的16SrDNA、gyrB、recA、dnaJ