不同淡水鱼类维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

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1、分类号：S942.2单位代码：10193密级：公开学号：2012652硕士学位论文不同淡水鱼类维氏气单胞菌的分离鉴定及耐药性分析IsolatedidentificationanddrugresistanceanalysisofAeromonasveroniifromdifferentfreshwaterfishspecies作者姓名：葛铮学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物疾病防治指导教师：高云航副教授所在学院：动物科学技术学院2015年3月本研究由国家自然科学基金项目（31201927）国家质检总局科技计划项目（2013IK163）联合资助Funded

2、byNationalNaturalScienceFoundationofChina（No.31201927）andAQSIQscienceandtechnologyprojects（No.2013IK163）独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本

3、人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读

4、研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要维氏气单胞菌作为重要的水生生物病原菌以及人畜共患病病原菌，不仅给水产养殖业造成严重经济损失，而且病原可通过水源性、食源性以及伤口感染等方式传播，引起人类发生肺炎、败血症以及食物中毒等病症。同时，由于养殖业者对各种抗菌药物的不合理应用，使维氏气单胞菌的耐药性不断产生，从而给淡水鱼类疾病的预防和控制带来新的困难。本研究以东北地区不同淡水鱼类维氏气单胞菌为研究对象，通过病原分离与鉴定、耐药性分析、整合酶检测及耐药基因盒分析，明确东北

5、地区不同淡水鱼类维氏气单胞菌感染情况、耐药情况以及耐药性基因多样性，进而为指导水产养殖临床用药以及进一步研究其耐药机制等提供理论依据。1.不同淡水鱼类维氏气单胞菌的分离与鉴定通过流行病学调查，采集东北三省不同地域、不同品种鱼类爆发的维氏气单胞菌病疑似病料，经分离培养、涂片镜检、生理生化鉴定、致病性试验及16SrDNA序列分析，结果共分离出52株具有明显致病性的维氏气单胞菌，且不同菌株致病性及生物学特征存在一定的差异。2.不同淡水鱼类维氏气单胞菌耐药情况分析采用微量肉汤稀释法测定从临床发病的淡水鱼类中分离获得的52株维氏气单胞菌的最小抑菌浓度，分析其耐药情况，以期为指导水

6、产临床用药提供一定的参考。结果分离得到的52株维氏气单胞菌存在比较严重的耐药性，且不同地域分离的维氏气单胞菌菌株对常用的抗菌药物的MIC结果存在明显差异。其中对庆大霉素、阿莫西林、红霉素全部耐药；对阿米卡星和阿奇霉素的耐药率较高；其次是环丙沙星、强力霉素和恩诺沙星，耐药率分别为78.85%、63.46%和57.69%；氟苯尼考和氯霉素的耐药率最低，分别为15.38%和11.54%；同时出现了多重耐药情况，分别为6重耐药、7重耐药、8重耐药、9重耐药、10重耐药和全部耐药。其中8重耐药和9重耐药分布最广，分别是26.92%和36.54%。3.维氏气单胞菌整合酶检测及阳性整

7、合子耐药基因盒分析对分离获得的52株维氏气单胞菌进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶检测，并对整合酶阳性的菌株进行3′保守区及可变区耐药基因盒确定及序列分析。结果所有分离获得的维氏气单胞菌对Ⅰ型整合子的携带情况是100%，所有菌株不携带Ⅱ、Ⅲ型整合子；且其Ⅰ型整合子结构均完整，存在含有sulⅠ、qacE及ORF5基因的3′保守区，其中14株Ⅰ型整合子结构I完整的维氏气单胞菌中存在耐药基因盒，其耐药基因盒的检出率为26.92%。14株菌共存在4种不同的耐药基因盒，分别为aadA1-catB、drfA-orfF-aadA1、aac（6′）-Ib-cr-ar