靶向阻断神经激肽1受体抑制白血病细胞增殖的机制及其对白血病骨癌痛的作用研究

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1、万方数据浙江理工大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：勿榜勺签字日期：如，占年∥么月4曰万方数据学位论文版权使用授权书惝Y㈣3燃06㈣7529本学位论文作者完全了解浙江理工大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本

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3、童和35岁以下成人恶性肿瘤死亡率中，白血病居第一位。同时，由白血病引发的骨癌痛严重影响了白血病病人的生存质量。目前临床应用的白血病治疗药物存在种类少、靶向性差、不能完全达到预期治疗效果。因此，寻找和开发更加有效的血病治疗药物、降低药物的毒副作用、提高治愈率，始终是白血病研究领域的热点。速激肽家族的经典成员P物质(SP)及其神经激肽受体1(NeurokininReceptor1，NKlR)参与了人类多种生理和病理过程。如SP是体内重要的疼痛递质；在多种肿瘤中，NKlR的表达量往往与肿瘤的恶性程度呈正相关，且NKl

4、R的拮抗剂有望成为抗肿瘤新药。在本论文中，我们将采用NKlR第三代高选择性和特异性的拮抗剂SRl40333靶向阻断NKlR，研究SRl40333靶向阻断NKlR后抑制白血病细胞增殖的机制及其对白血病骨癌痛的作用。我们的研究结果显示，NKlR在髓系白血病患者外周血白细胞中呈现高表达。MTT结果显示SRl40333显著地抑制K562细胞和HL．60细胞的增殖；流式细胞术检测周期发现，SRl40333阻断NKlR后，引起了K562细胞中G0／G1期细胞比例显著升高，而S期细胞比例显著降低。采用Westernblott

5、ing研究发现，SRl40333靶向阻断NKlR后引起的K562细胞周期阻滞与周期相关蛋白如CyclinD1、CyclinD2、CyclinD3、CyclinE1、CyclinB1、CDK4、CDK5，CDK71Cdc25A、P15、P16、P18、P21的表达改变密切相关；另外，SRl40333靶向阻断NKlR也能诱导K562发生凋亡，如Hoechst33342染色后可出现明显的凋亡小体，流式细胞术检测发现早期凋亡和晚期凋亡细胞比例显著增加，该过程与凋亡相关蛋自如PARP／CleavedPARP、Bcl-2、

6、Bcl—xL、Cleavedcapsese3、Cleavedcapsese3、Bax、Bim的表达变化有关；K562细胞和D．Luciferin．K562细胞体内移植瘤实验结果显示，在BALB／c裸鼠体内SRl40333能显著抑制K562细胞的生长。在本论文中，我们构建了K562细胞的小鼠骨癌痛模型!并评估了SRl40333靶向阻断NKlR后对白血病骨癌痛的作用。研究结果显示，给ICR小鼠胫骨注射K562细胞后能引起小鼠自发性疼痛。SRl40333能显著缓解K562引起的骨癌万方数据浙江理工大学硕士学位论文靶向

7、阻断神经激肽1受体抑制白血病细胞增殖的机制及其对白血病骨癌痛的作用研究痛，HE染色结果显示胫骨注射K562细胞后出现了骨边缘破损，骨皮质脱落至骨髓腔等骨组织破坏情况，这与癌痛的行为学指标相一致；采用Westernblotting研究结果显示SRl40333缓解白血病骨癌痛的机制与其阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关；另外，Westernblotting和免疫组化的研究结果也显示SRl40333缓解白血病骨癌痛的机制也与提高内源性阿片肽和阿片受体如POMC和MOR的表达有关。另外，我们采用蛋白质组学技术和转录组学技术

8、进一步研究了SRl40333靶向阻断K562细胞中的NKlR后在组学水平对K562细胞生长的调控作用。在SRl40333处理后我们在定量蛋白质组学水平鉴定出了的5310个差异蛋白，这些差异蛋白中有713个发生显著上调，有401个发生了显著下调。赖氨酸乙酰化修饰组学水平，我们发现在1571种蛋白中共有3474个赖氨酸乙酰化位点发生了差异表达修饰，有92个赖氨酸乙酰化位点中的120个位点发