补肾活血中药治疗激素性股骨头缺血性坏死的蛋白质组学和临床研究

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1、㈣嬲广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名锄日期：施年厂衫日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本

2、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签寸仑文导师签名日期劬钟年厂月弓Fl摘要背景：股骨头缺血性坏死(ONFH)是因各种原因导致股骨头血供受损或中断，继而引起骨细胞及骨髓成分变性、坏死，进而致使股骨头结构发生改变，晚期伴有股骨头塌陷，引起患者髋关节疼痛、功能活动受限的疾病，是骨科领域常见的、多发的、难治的疾病之一，一般预后比较差，致残率高。近些年来，激素在临床上得到越来越广泛的使用，而其引起的激素性股骨头缺血性坏死(SANFH)已经占非

3、创伤性股骨头缺血性坏死的首位。探讨SANFH具体的发病机制，对疾病的早期诊断和治疗均有极大的帮助，但SANFFI明确的发病机制目前仍不是十分清除，流行的引起该病的发病机制主要有以下几种：脂质代谢紊乱学说，血管内凝血学说，骨质疏松学说，骨内高压学说，血粘度增高学说，血管炎性变学说以及其他多种学说。蛋白质组学技术是相对比较新的研究领域，近年来对其技术的研究在相关领域得到了一定程度上的普及。该技术从机体的整体着手，研究生命活动规律，揭示生理及病理现象，已经在医药相关领域得到极其广泛的研究和应用，其能发现与疾病诊断、治疗及判断预后有关的小分子量、

4、低丰度蛋白质及多肽的信息，进而在基础医学研究和临床医学研究中发挥重要的作用。蛋白质组学在骨科疾病的研究中已经取得多项重大进展，包括在激素性股骨头缺血性坏死研究领域，均显示了广阔的发展前景。中医药在SANFH的早期预防和治疗中均发挥着不可替代的作用，已有大量研究证明多种中药单体和复方对早期的SANFH具有明确的治疗效果。袁氏生脉成骨片(以下简称生脉成骨片)是我院经验用药，对其已经进行了大量的基础和临床研究，证实其具有补肾活血、消肿止痛、改善循环及提高机体免疫力的作用，但用其治疗早期股骨头缺血性坏死患者前后血清蛋白标志物究竟有何变化，以及其治

5、疗股骨头缺血性坏死更具体的作用机制仍有待进一步的深入研究，以为进一步开发新药或提高药物疗效奠定基础。目的：1．比较生脉成骨片治疗SANFH患者前后血清中蛋白的表达，通过双向电泳及质谱分析技术明确及鉴定治疗前后表达水平上调或下调的蛋白质，并通过蛋白质组生物信息学查询差异蛋白的功能，以揭示该药物具体的作用机制，并做出对其疗效的初步判定。2．比较生脉成骨片治疗SANFH患者前后血脂六项(总胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白AJ、载脂蛋白B、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白)的变化，髋关节Harris评分(包括疼痛、功能、活动范围及畸形四项)的变化以及VAS评

6、分水平的变化，观察生脉成骨片对患者的临床治疗作用，除此之外，验证基础研究中相关差异蛋白治疗前后表达水平的变化是否符合实验室检查指标的变化。方法：1．基础研究收集2012年3月至2013年9月在广州中医药大学第一附属医骨科门诊就诊并确诊为激素性股骨头缺血性坏死的患者，共20例，全部为ARCO分期I～II期的患者。采用自身前后对照，服药前为对照组，提取患者血清，置于一80。冰箱备用；服药后为实验组，所有患者均给予生脉成骨片，口服，每日3次，每次8粒，治疗期间停止服用激素，2个月后患者复查时再次抽取患者血液，提取血清。将治疗前后的样本分别混匀，

7、应用双向电泳技及质谱分析技术建立两样本的血清蛋白图谱，找出两样本间有统计学差异的蛋白质，并鉴定及查询差异蛋白的具体功能，筛选出药物治疗前后的变化与SANFH有重要关联的蛋白。2．临床研究研究对象同基础研究部分，检测生脉成骨片治疗SANFH患者前后血脂六项的变化，以及髋关节Harris评分、VAS评分治疗前后的变化，进行统计学分析，明确生化指标及评分变化是否具有统计学上的差异。结果：1．在本论文基础研究中，生脉成骨片治疗SANFH患者后，血清中共21个有显著统计学差异(大于2倍)的蛋白点被筛选，其中实验组患者蛋白质点表达上调的共6个，并标记

8、为A组分别编号，实验组患者表达下调的点14个，标记为B组分别编号，成功鉴定21个蛋白点，在NCBI数据库TooLs及Bio软件搜索，得到的有重要差异蛋白点共有5个。2．所有患者经生脉成骨片治疗