基于甘露糖受体的新型非病毒基因传递载体的制备及评价

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1、⑧论文作者签名：篮旌么指导教师签名：二二翘万方数据评阅人4．委员3：委员4：万方数据UIIIIlllUllUlIlllllIIlY2662378浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名_每汀夏磊签字日期：砷辟年3月名日学位论

2、文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙鎏太堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：1铽∥会导师签名：签字日期：弘f牛年3月％日签字日期：≯1呻年≥月V乙万方数据浙江大学硕士学位论文致谢求学路上，乡愁是张窄窄的车票，我在这头，你们在那头。成长路上，你们的儿子羽翼渐丰，而你们还没好好感受年轻就老了。柴米油

3、盐半辈子的辛勤，又岂是用一声谢谢道的清说的明的。求学路上，思愁也是张窄窄的车票，我在这头，你在那头。五年时光，感谢你在我理想里添加的鼓励，感谢你在我疲惫中给予的力量。九百公里也好，三百公里也罢，未来千万万公里的路途，你若不离不弃，我必生死相依。韶华不记忆，岁月不流年。回首这三年，科研之路如浪似潮，会有时乘风破浪，有时被拍死在沙滩上。在此，我要特别感谢我的导师高建青教授，其广博的学识、严谨的治学、忘我的工作态度使我受益匪浅。在课题的研究中，高建青教授给予我的悉心指导及无私帮助，让我在这三年中有了巨大的成长。在此亦要感谢姚醒蕾博

4、士，年轻那会没少给你惹麻烦。感谢你成为我科研路上的掌灯人，引领我走上科研之道。为一己之学术观点两相争得耳赤的场景依然在目，不禁唏嘘。感谢陈煜哲师兄，成为那盏灯，教予我诸多的实验技能，也愿你在大洋彼岸一切顺利。在课题的研究中，还得到韩曼老师、应晓英老师、胡瑜兰老师、彭丽华老师的指导与帮助，深表谢意。感谢汤谷平老师、张辰老师、Tabata先生对于课题设计的意见，感谢药学院陈枢青老师、马丽老师、莫建霞老师，医学院生化平台李艳霞老师、黄莹莹老师、朱有法老师，化学系分析测试中心李巧玲老师，农学院王：华老师、李艳琴老师、盛奎川老师，生科

5、院张麝龙老师，好友张骞、李海杰等在实验中提供的无私帮助。铁打的营盘流水的兵。同门的师兄弟姐妹，李旎、陈煜哲、陈希、吕清、张添源、魏巍、黄冰、唐鑫江、李黎明、袁忠月、单颖慧、陈芝兰、姚梦竹、吴海滨、蒋心驰、王霞蓉、牛杰，感谢你们的陪伴与帮助。花开花落又一季，422的故事你们是否还会记得?感谢一路走来的良师、益友、损友、基友，谢谢你们的关心、帮助及支持。T万方数据浙江大学硕士研究生论文致谢最后还要谢谢你，阮桂鑫同学，感谢你尚未被搞大的肚子。或许你迷惘过、堕落过、懊悔过，但是谢谢你那时的思考，那时的奋进，那时的坚持。人生二十五载，

6、往事恍如梦幻，未来的道路上，需要你更多的思考与努力。lJ万方数据浙江大学硕士学位论文摘要基于甘露糖受体的新型非病毒基因传递载体的制备及评价浙江大学药学院药剂学硕士研究生阮桂鑫导师高建青摘要目的：根据甘露糖载体的特点设计合成精胺一甘露聚糖载体(SM)，对其及其基因复合物进行表征，并将SM基因传递体系应用到体内基因传递中，实现肝脏靶向转染；将其应用在体外基因传递，实现对甘露糖受体表达的细胞高效转染，并探索其作用机理。方法：1．合成不同接枝率SM载体并以FTIR、DSC、H1-NMR及元素分析测试表征，M1vr法筛选其细胞毒性，通

7、过虫荧光素酶报告基因筛选其转染效率，孵育法制备其复合物并进行粒径、电位、形态表征；2'牙4用SM／FITC—DNA通过活体成像技术观察SM基因复合物的组织分布，筛选其靶向性，测定粒径及转染效率评价血清对其干扰，利用组织切片HE染色评价SM传递体系的肝脏毒性，并通过绿色荧光蛋白报告基因载体转染肝脏评价其转染效率；3．MTT法评价SM基因传递体系在不同细胞的细胞毒性，并转染评价其在不同细胞上的转染效率，与PEI、Lipo、SP在MMR．及MMR+细胞上进行转染及毒性比较，并通过不同的竞争抑制剂、入胞抑制剂及钙离子螯合剂探究SM入

8、胞机理，通过标记SM与DNA探索其在细胞内转运情况，并通过溶酶体染色探索其溶酶体逃逸情况。制备原代的骨髓源树突状细胞并初步鉴定，流式细胞术测定其对SM／FITC-DNA的摄取，利用EGFP报告基因对BMDC进行转染评价。结论：成功设计合成了精胺一甘露聚糖非病毒基因载体材料，并对其进行表征。