大孔吸附树脂预处理-hplc法测定甘肃棘豆中苦马豆素含量

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1、第16卷第l期分析测试技术与仪器Volume16Numberl20l0年03月ANAI,YSISANDTESTINGTECHNOI．OGYANDINSTRUMENTSMar．2010www.grain17.com分析测试新成果(6一10)大孑L吸附树脂预处理一HPLC法测定甘肃棘豆中苦马豆素含量段秋燕1，一，黄新异1，李辰1，倪京满2，邸多隆1'2(1．中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室和甘肃省天然药物重点实验室，甘肃兰州730000；2．兰州大学药学院，甘肃兰州730000)摘要：应用大孔吸附树脂为样品前处理技术，对甘肃棘豆中干扰苦马豆素含量测定的化合

2、物进行选择性吸附除杂，以HPLC法测定样品中的苦马豆素含量．方法的平均回收率为92．81％(相对标准偏差为3．67％)，日内和日间精密度分别为1．40％和3．98％，线性范围为0．022～0．730mg／mL，方法检出限为0．010mg／mL．方法可有效去除苦马豆素测定的干扰化合物，适用于甘肃棘豆中苦马豆素的含量测定．关键词：大孔吸附树脂；甘肃棘豆；苦马豆素中图分类号：0657．35文献标识码：B文章编号：1006-3757(2010)Ol-0006-05甘肃棘豆(OxytropisKansuensisBunge)是豆科糖苷酶活性抑制分析法中，由于酶活性所受条件较棘豆属多年生草本植物

3、，主要分布在祁连山脉的高多，重现性不理想．文献[5]报道的高效液相色谱法山草甸草原，是疯草的一种，能够造成牧畜的中毒．样品需要量大，样品前处理程序繁琐，且流动相pH据报道，引起家畜疯草中毒的主要毒性成分是苦马值较高，使色谱柱的使用寿命缩短．由于苦马豆素在豆素(见图1)．研究发现苦马豆素除具有毒性外，还甘肃棘豆中的含量极低约23mg／kg【13，且苦马豆素具有抗肿瘤和免疫刺激作用．因此，以苦马豆素为有为多羟基的吲哚兹定类生物碱，分子中无双键，仅在效成分的新药研究，引起了国内外学者的广泛关注，紫外末端有吸收(200am左右)．通常的HPLC法测在国外已进入临床研究阶段L1j．目前，苦马豆

4、素的定甘肃棘豆中苦马豆素的含量，容易受到杂质干扰，来源主要有合成法、生物法和植物提取法．由于合成导致结果不准确．利用大孑L吸附树脂进行样品前处法和生物法技术尚不成熟，因此苦马豆素主要是从理，达到富集或净化的目的，已越来越多的应用于天植物中提取分离得到．苦马豆素主要存在于豆科苦然产物复杂体系的样品前处理¨J．本实验以大孔吸马豆属(Swainsonia)、棘豆属(Oxytropis)和黄芪属附树脂对甘肃棘豆中干扰苦马豆素含量测定的成分(Astragalus)、旋花科番薯属(Ipomoeacarnea)、锦葵进行选择性吸附除杂，用高效液相色谱(HPLC)测科黄花稔属(Side)植物中口J，

5、其中在甘肃棘豆中含定甘肃棘豆中苦马豆素的含量，操作简单、重现性量最高．目前，苦马豆素的含量测定方法主要有气相好，为甘肃棘豆植物资源的开发利用和新药研究提色谱法(GC)口J、薄层扫描法(TLSC)HJ、高效液相色供了参考．谱法(HPLC)IS]、o【一甘露糖苷酶活性抑制分析法(d1实验部分—MIA)∞J．气相色谱法样品需要柱前衍生化，操作繁琐；薄层扫描法中，由于苦马豆素极性大，拖尾严1．1仪器、材料与试药重，所以实验对点样和展开过程要求严格；a一甘露Agilentl200高效液相色谱系统(美国，Agilent收稿日期：2009—12—07；修订日期：2010—02—05．基金项目：中科

6、院知识创新工程重要方向项目(No．KGCX2一SW一213—08)；中科院“百人计划”项目．作者简介：段秋燕(1980一)，女，硕士研究生，研究方向为中药制剂质量控制分析技术．通讯作者：邸多隆，研究员．E—lit㈦：didl@lzb．ac．cn；倪京满，教授．E—mail：lmm2004@hotmail。corn万方数据7第1期段秋燕，等：大孔吸附树脂预处理一HPLC法测定甘肃棘豆中苦马豆素含量公司)，包括G1322A脱气机，G1311A四元泵，醚，于50℃超声40min脱脂，过滤，弃去滤液．向药G1328BDAD检测器。AgilentChemstation数据处理渣中加入25mL乙

7、醇，50℃下超声提取40min，过系统；CH一8606微量分析天平(瑞士，梅特勒托利滤，再向药渣中继续加入25mL乙醇，于同样条件下多公司)；RE一52C型旋转蒸发仪(巩义市英峪予华重复超声提取一次，过滤．合并两次滤液，减压浓缩仪器厂)，SHZ—D型循环水式真空泵(巩义市英峪至近干，加水溶解至10mL，得浓度为每毫升中含相予华仪器厂)；KQ一250DE型数控超声波清洗仪当于原药材0．1g的提取液．(昆山市超声仪器有限公司)．1．3．3提取样品预处理将1．3