免疫纳米金催化氯金酸-盐酸羟胺光度法检测免疫球蛋白g

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1、万方数据第28卷，第12期208年12月光谱学与光谱分析V01．28，No．12，pp2935—2938SpectroscopyandSpectra／AnalysisDecember，2008免疫纳米金催化氯金酸-盐酸羟胺光度法检测免疫球蛋白G邓俊耀1’2，张声森1，蒋治良h3+1．广西师范大学环境与资源学院，广西桂林5410042．桂林市妇幼保健院，广西桂林5410013．桂林工学院材料与化学工程系，广西桂林541004摘要在pH2．27的柠檬酸钠一盐酸缓冲溶液中，纳米金对氯金酸一盐酸羟胺生成较大粒径金颗粒这一慢反应具有较强的催化作用

2、。较大粒径金颗粒在600～1000nln处有一个较宽的吸收峰。将纳米金标记羊抗人IgG获得免疫纳米金，免疫纳米金也具有相同催化效果。在一定条件下，金标记羊抗人IgG与IRG发生特异性结合生成纳米金免疫复合物。以16000rpm速度离心分离获得未反应的纳米金标抗上层溶液。以它作为催化剂催化氯金酸一盐酸羟胺微粒反应，700nm处的吸光度A瑚。线性降低。其降低值△A彻。与IgG在0．1～10llg·mLll范围内呈良好线性关系，检出限为0．06rig·n1L～。本法具有灵敏、快速和较高的特异性，用于定量分析人血清IgG，结果满意。关键词免疫球

3、蛋白G；免疫纳米金；纳米金催化；光度法中图分类号：()657．3文献标识码：ADOI：10．3964／j．issm1000-0593(2008)12—2935—04引言胶体金标记技术因具有简单、快速、无污染等特点，在免疫检测中应用广泛[1．3]。近年来，以标记后的免疫纳米金作品种来放大检测信号取得了很好的结果[4。121。免疫球蛋白G是一种常见的抗原，它的分析方法已有报道[1¨引。但未见采用简便易推广的光度法傲检测技术[17J81，将免疫纳米金一氯金酸-盐酸羟胺催化反应与金标记免疫反应结合测定痕量IgG的工作发表。本文建立了一个测定超痕

4、量IgG的高选择性的免疫纳米金催化分光光度新方法。1实验部分1．I仪器与试剂TUl901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；SKLH超声波反应器(上海科导超声仪器有限公司)；HH-S2电热恒温水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂)。人IgG与羊抗人IgG(标准品，上海捷门生物技术合作公司)；人血清样品(桂林市一八一医院)；0．20mol·L-1磷酸氢二钠与0．10mol·L叫柠檬酸配制的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液；聚乙二醇6000(华美生物工程公司)；100嵋·mL-1胶体金(5，i0，15nm)；1．oZ柠檬酸钠；H

5、AuCL·4Hzo(国药集团化学试剂有限公司)；NH20H·HCI(广东西陇化工厂)；pH为1．67～3．69柠檬酸钠一盐酸缓冲溶液，1．5mol·L-1NHs·Hzo。金纳米粒子制备采用柠檬酸三钠法。羊抗人IgG的金标记：用0．10mol·L叫l(2C03溶液、0．10mol·L-1HCI和精密pH值试纸将100mL胶体金溶液的pH值调到6．5。在磁力搅拌器缓慢搅拌下，将4．5mL羊抗人IgG(1：25)滴加到胶体金溶液中，控制时间为5min，然后加入1．67mL3．0％PECr20000作为稳定剂(其最终浓度约为0．05％)，搅拌1

6、5min后放置4℃保存。纳米金标羊抗人IgG(NG-anti-IgG)的浓度按金计算为53．8越·mL～。所用试剂均为分析纯，实验用水均为亚沸高纯水。1．2实验方法依次移取0．20mLpH值为7．0的磷酸氢二钠一磷酸二氢钠缓冲溶液，0．60mL53．8埏·mL-1金标记羊抗人IgG于刻度试管中，和一定体积15越·mL-1人IgG溶液于刻度试管中，充分混匀后，加入0．80mL30％PEG6000，然后将溶液稀释到3．0mL，在超声波反应器中温育15rain，然后以转速16000rpm离心IgG胶体金免疫复合溶液30min，移取上层清液备用

7、。依次移取0．50mLpH值为2．27的柠檬酸酸钠一盐酸缓收稿日期：2007-08-28，修订日期：2007—12—02基金项目：国家自然科学基金项目(20667001)，广西自然科学基金项目(0728213)和广西新世纪十百千人才基金项目资助作者简介：邓俊耀，1966年生。广西师范大学环境与资源学院检验师*通讯联系人e-mail．．zljiang(马mailbox．gxnu．edu．Ell万方数据2936光谱学与光谱分析第28卷冲溶液，40．0pL上层清液，0．40mL0．59mmol·L_1HAuCh和0．60mL8．0mmol·I

8、．-1NH20H-HCl于5．0mL刻度试管，然后定容到2．5mL置于30℃恒温水浴6min。取适量于比色皿中，置于分光光度计上，测定700nn3处的吸光度A700。，不加人IgG作空白并测定其空白值(A7