eIF-4A在宫颈癌发病机制中的作用及其与HPV感染关系的研究.pdf

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1、分类号：R737.37密级：公开学校代码：11065学号：Y0114130126专业博士学位论文eIF-4A在宫颈癌发病机制中的作用及其与HPV感染关系的研究作者姓名马德花指导教师赵淑萍教授专业领域妇产科学培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月11日eIF-4A在宫颈癌发病机制中的作用及其与HPV感染关系的研究摘要目的1.检测真核翻译起始因子4A(eIF-4A)在宫颈癌组织、高级别宫颈病变组织、低级别宫颈病变组织及正常宫颈组织中的表达，检测相应患者宫颈细胞中HPV感染情况，分析eIF-4A在宫颈癌

2、发生过程中及在宫颈HPV感染致病过程中的可能作用。2.研究针对eIF-4A的小分子干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰(RNAi)技术对人宫颈腺癌Hela细胞(HPV18+)及宫颈鳞癌Siha细胞（HPV16+）中eIF-4A基因及蛋白的靶向抑制作用，检测后续对细胞中cyclinD1的表达及细胞生长、存活、增殖的影响，探讨针对eIF-4A的siRNA介导的RNAi技术在宫颈癌基因治疗中的应用前景。方法组织水平上，由于宫颈癌是一种由正常宫颈逐渐进展为宫颈癌前病变乃至宫颈癌的过程，本研究检测eIF-4A在

3、正常宫颈组织、宫颈癌变过程中不同阶段的宫颈组织及宫颈癌组织中的表达，结合患者HPV感染情况，评估eIF-4A蛋白在宫颈癌变过程及HPV感染致宫颈病变过程中的可能作用。细胞水平上，由于宫颈鳞癌和腺癌在发病原因、HPV感染型别及生物学特点、治疗方法等方面存在明显差异，选择较为成熟、稳定传代的宫颈腺癌Hela细胞(HPV18+)及宫颈鳞癌Siha细胞（HPV16+）进行研究，探讨靶向干预体外培养的宫颈癌细胞中eIF-4A的表达及其对人宫颈癌细胞中cyclinD1表达及细胞增殖。1.应用免疫组织化学方法检测40例

4、正常宫颈组织、40例低级别宫颈病变组织（CINI级）、40例高级别宫颈病变组织（CINII、III级）及60例宫颈癌组织中eIF-4A蛋白的表达。2.应用Westernblot方法检测40例正常宫颈组织、40例低级别宫颈病变组织（CINI级）、40例高级别宫颈病变组织（CINII、III级）及60例宫颈癌组织中eIF-4A蛋白的含量。3.所有入组患者治疗前收集宫颈细胞，应用第2代杂交捕获（HybridCapture，HC2)方法检测40例正常宫颈患者、40例低级别宫颈病变（CINI级）、40例高级别宫颈病

5、变（CINII、III级）及60例宫颈癌患者的宫颈细胞中HPVDNA感染的情况。4.体外培养人宫颈腺癌Hela细胞及宫颈鳞癌Siha细胞，向细胞中转染针对eIF-4A的序列特异性小干扰RNA（siRNA）及阴性对照siRNA。5.转染后48小时，应用实时荧光定量PCR检测转染后人宫颈腺癌Hela细胞及宫颈鳞癌Siha细胞中eIF-4AmRNA的表达。6.转染后48小时，应用WesternBlot方法检测人宫颈腺癌Hela细胞及宫颈鳞癌ISiha细胞中eIF-4A蛋白表达水平。7.转染后72小时，应用Wes

6、ternBlot方法检测人宫颈腺癌Hela细胞及宫颈鳞癌Siha细胞中cyclinD1蛋白的表达水平。8.转染后48小时，应用MTT法检测转染后对宫颈腺癌Hela细胞及宫颈鳞癌Siha细胞生长、存活能力的影响。9.分别于转染后12h、24h、48h、72h，应用细胞计数法检测转染后各组中细胞生长、增殖能力。结果1.免疫组化结果显示eIF-4A蛋白定位在宫颈上皮的胞质，呈棕黄色颗粒状，经统计学分析发现，eIF-4A蛋白在正常宫颈组织、低级别宫颈病变组织、高级别宫颈病变组织及宫颈癌组织中的阳性表达率明显不同（

7、χ2=94.12，P<0.05），其中，eIF-4A蛋白在高级别宫颈病变组织中的阳性表达率（31/40，77.5%）明显高于其在低级别宫颈病变组织中的阳性表达率（17/40，42.5%），差异有显著性（χ2=10.21，P<0.05）；eIF-4A蛋白在低级别宫颈病变组织中的阳性表达率（17/40，42.5%）明显高于其在正常宫颈组织中的阳性表达率（0/40，0%），差异有显著性（χ2=19.12，P<0.05）；eIF-4A蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率(54/60,90%)明显高于其在低级别宫颈病变组

8、织中的阳性表达率（χ2=26.3,P＜0.05）及其在正常宫颈组织中的阳性表达率（χ2=74.68,P＜0.05），差异均有显著性意义。但是，eIF-4A在宫颈癌中的阳性表达与其在高级别宫颈病变组织的阳性表达之间的差异无明显统计学意义（χ2=2.94，P＞0.05）。2.本研究发现，eIF-4A蛋白在低分化宫颈癌组织中的阳性表达明显高于其在中高分化宫颈癌中的阳性表达（χ2=4.14，P<0.05），有淋巴结转移的宫颈癌中eIF