EGCG增强间充质干细胞在皮肤伤口愈合中作用的研究.pdf

《EGCG增强间充质干细胞在皮肤伤口愈合中作用的研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R75密级：公开学校代码：11065学号：y0115130067专业博士学位论文EGCG增强间充质干细胞在皮肤伤口愈合中作用的研究作者姓名李民指导教师陈官芝教授专业领域皮肤病与性病学培养单位医学部临床医学系答辩日期2018年5月19日EGCG增强间充质干细胞在皮肤伤口愈合中作用的研究摘要目的：伤口愈合的恢复过程通常是通过细胞外基质、细胞和旁分泌因子之间的复杂的相互作用来实现的。在许多疾病中，一种或几种机制受损可以导致愈合过程的失败或混乱，从而造成伤口的难以愈合。间充质干细胞（MSCs）在伤口愈合中的有益作用得到了众多研究的广泛支持。然

2、而，其促进伤口愈合的机制尚未完全揭开。在很多病理情况下，表没食子儿茶素没食子酯酸（EGCG）凭借其强大的抗氧化和清除自由基的功能能够有效的发挥其防止组织破坏的作用。EGCG在各种动物模型中已经被证实能够促进伤口愈合的修复过程，提高治疗效果。本研究通过EGCG与MSCs在伤口愈合中的联合应用情况，探讨EGCG是否可以提高MSCs在皮肤伤口愈合中的效率，并探讨两者协同作用的可能机制，为临床治疗各种皮肤伤口提供新的治疗思路，具有广泛的临床应用价值和学术意义。方法：（1）小鼠骨髓MSCs培养，从8周龄的雄性小鼠胫骨和股骨收集骨髓细胞，并在胎牛血清培养

3、皿中培养。本研究采用传代5-10代的MSCs。采用荧光活化细胞分选法（FACS）进行鼠MSCs的鉴定。（2）皮肤创伤模型的建立：本研究采用雄性s-d大鼠（200-220g）。首先将大鼠麻醉，背部备皮，在背部做一个直径1cm的皮肤全层切除手术，从而建立一个皮肤创伤模型。将大鼠分为4组：对照组；EGCG组，10mg/kg，术后1小时单剂量腹腔注射；MSCs注射组，1×106MSCs，术后10分钟单剂量腹腔注射；联合治疗组。研究期间动物单独饲养，对伤口愈合情况进行观察。（3）直接观察记录各组皮肤伤口面积缩小情况，术后20天，收集伤口部位的皮肤，HE

4、染色，光学显微镜分析和成像；术后1、5、10、15、20天测定伤口组织血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生子因子（TGF）-β1、TGF-β3、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-1β、IL-6；p-AKT、p-mTOR的水平；用RT-PCR法测定各因子mRNA表达水平,Westernblot测定蛋白水平,并配合ELISA检测相互印证。数据表示为平均数±标准差表示。使用Prism软件对数据进行评估，采用双向方差分析，然后是Tukey分析。统计学意义用*P<0.05和**P<0.01v

5、s对照组，或#P<0.05和##P<0.01vsMSCs单独组表示。结果：（1）培养的细胞能够在培养基上呈现特异的纺锤形态，流式细胞仪显示细胞Sca-1+，CD44+，CD45-，CD34-和CD14-，鉴定为MSCs。另外，作为污染物的造血I干细胞谱系是非常微量的，而且这些细胞可以通过CD45、CD34和CD14的阴性表达区分。（2）在伤口面积、表皮厚度方面：MSCs组中观察到的愈合情况明显改善，表现为实验过程中伤口面积减少更为迅速（在第5、10、15、20天分别为73.58±7.25、38.65±2.72、17.43±1.88、5.58±

6、0.87，P<0.05），损伤皮肤表皮厚度的显微镜测量表明表皮再生的速度更为显著（161.21±18.35，P<0.01），单独应用EGCG(10mg/kg)对愈合影响不明显，联合治疗组改善最明显（在第5、10、15、20天面积减少分别为46.35±7.05、24.25±1.98、5.98±1.01、1.71±0.11，P<0.01，再生速度为251.32±20.41，P<0.01）。（3）在促进伤口血管生成方面：术后第5天和第10天，MSCs组VEGF（421.67±65.25、144.42±8.64，P<0.05）与bFGF（389.58

7、±70.43、156.33±9.05，P<0.01）的水平增高，单独应用EGCG组未见升高，联合治疗组增高最明显（VEGF：622.58±70.28、174.23±9.45，P<0.01）；bFGF：592.58±47.02、191.58±10.41，P<0.01）。这表明单独应用MSCs有促血管生成作用，单独应用EGCG无此作用，而EGCG能够增强MSCs的促血管生成作用。（4）在调节瘢痕因子方面：在术后5、10、15、20天，MSCs组TGF-β1（分别为63.10±7.77、90.21±9.24、120.01±11.25、159.58±

8、12.03，P<0.01）、α-SMA（分别为50.21±5.24、59.55±6.01、52.36±5.65、58.05±6.54，P<0.01）表达下降而TGF