细粒棘球绦虫原头蚴侵染RAW264.7细胞不同时间段基因差异表达分析.pdf

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1、分类号：密级：学号：2015201710单位代码：10759石河子大学硕士学位论文细粒棘球绦虫原头蚴侵染RAW264.7细胞不同时间段基因差异表达分析学位申请人卢平萍指导教师薄新文研究员申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称预防兽医学研究方向寄生虫病诊断与防治所在学院动物科技学院中国新疆石河子2018年6月AnalysisofdifferentiallyexpressedgenesatdifferenttimeintervalsinRAW264.7cellsinfectedwithEchinococcusgranulosusADissertationSubmittedtoShiheziUni

2、versityInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeofMasterofAgricultureByLuPingping(PreventiveVeterinaryMedicine)DissertationSupervisor:Prof.BoXinwenJune,2018石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明

3、确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日I全文摘要囊型包虫病（CE）是由细粒棘球绦虫（Echinococcusgranulosus，E.g）引起的广泛的人畜共患寄生虫病。CE是一种复杂的疾病，其致病机理和免疫反应等方面的问题还待解决。原头蚴（

4、Protoscoleces，PSC）是E.g的幼虫阶段的一种形态，可以与中间宿主发生免疫反应。PSC如何通过破坏宿主的免疫反应，产生病灶，其致病机制尚不清楚。本研究通过对PSC的体外培养观察以及PSC侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7试验，从细胞水平和转录组水平揭示宿主-寄生虫互作机制。1.细粒棘球绦虫原头蚴（PSC）的体外培养及观察：为了研究PSC在宿主体外环境的生长发育特征，本试验建立了原头蚴的体外培养体系。试验结果表明，培养至第10d时，虫体开始向成囊发育；第25d50%的原头蚴已经完全发育成囊；第35d90%的原头蚴完全发育成微囊，囊泡内的角质层增厚，顶突处的头沟完全消失；第50d时，

5、微囊逐渐增大，囊壁逐渐增厚；第70d微囊破裂，囊壁角质层内陷，虫体衰亡。本试验成功建立细粒棘球绦虫原头蚴的体外培养体系，研究了原头蚴在体外情况下的生长发育情况。2.PSC侵染RAW264.7细胞NO的变化规律研究：分别用PSC、包囊壁和囊液感染小鼠巨噬细胞RAW264.7，用Griess试剂检测不同侵染时间段NO含量的变化。结果显示，PSC可诱导巨噬细胞产生NO，巨噬细胞通过释放NO来抵御原头蚴的侵害；包囊壁既可以为虫体的生存提供寄生环境，也可使宿主防御寄生虫的侵害；包囊液对巨噬细胞的侵害不显著，可能为原头蚴的生长提供营养。本文通过研究NO在巨噬细胞抵抗棘球蚴感染时的变化规律，为揭示宿主在抵

6、抗寄生虫感染时的作用机制奠定基础。3.PSC侵染RAW264.7细胞因子的变化规律研究：通过研究PSC侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7后Th1和Th2型细胞产生的4种细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ随侵染时间的变化，探讨Th1和Th2细胞在虫体与宿主细胞直接接触后再次免疫中的意义。结果表明，感染的初期，虫体对细胞的损伤最严重，虫体与宿主细胞相互作用的过程中免疫保护和免疫损伤同时进行，且主要以Th1型细胞因子分泌为主，Th2型细胞因子分泌为辅。4.PSC侵染RAW264.7基因差异表达分析：通过转录组测序和生物信息学分析等不同手段，对PSC侵染小鼠巨噬细胞RAW264.7不同时

7、间段虫体以及宿主细胞的转录组进行了分析。研究发现，当PSC侵染RAW264.7细胞，PSC中显著上调的基因包括Proteinaseinhibitor、Serineproteases、Glycosidehydrolase、PhospholipaseA2、MHCclassI、Immunoglobulin、EF-Hand1、Tumournecrosisfactor、p53-liketranscriptionfact