短蛸微卫星标记开发及交配模式与性选择机制研究.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150150254上海海洋大学硕士学位论文题目：短蛸微卫星标记开发及交配模式与性选择机制研究Developmentofmicrosatellitemarkersandstudiesonmatingsystemandsexual英文题目：selectionmechanisminAmphioctopusfangsiao专业：渔业研究方向：头足类繁育生物学姓名：刘文芬杨建敏研究员指导教师：冯艳微博士二O一八年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取

2、得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学

3、位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注孙卫明烟台大学教授主席刘永胜烟台市水产研究所研究员委员王晓通鲁东大学教授委员委员委员张超山东省海洋资源与环境研究院秘书山东省海洋资源与环境研究院答辩地点答辩日期2018-5-18二楼会议室上海海洋大学硕士学位论文短蛸微卫星标记开发及交配模式与性选择机制研究摘要短蛸（Amphioctopusfangsiao）隶属于头足纲，是我国北部沿海最重要的经济种之一，由于市场需求和捕捞强度的增加使得自然资源日渐锐减。短蛸一般一年生，生命周期短，生长迅速，成为开展人工养殖的优

4、良品种。本研究以短蛸为研究对象，成功构建了短蛸均一化全长cDNA文库，进行了微卫星标记开发；利用微卫星亲权鉴定技术研究了短蛸的交配模式，并对其性选择机制进行了探讨，研究结果将为短蛸的人工繁育、增养殖及放流、种质资源保护工作提供重要参考。一、短蛸cDNA文库构建、微卫星标记开发及引物通用性分析本研究构建的cDNA文库库容为6.9×105个独立克隆，重组率达到95%，插入片段的平均长度大于1000bp。通过筛选共获得了3440条高质量的ESTs，拼接得到1803个unigenes。其中450条（25%）unigenes在GeneOntology系统下分为33类，通过比对KEG

5、G数据库将576个(31.9%)unigenes归入153个基因或可能参与的代谢途径，275个(15.3%)unigenes归为22个COG类别。从获得的ESTs中开发了119个多态性微卫星标记，每个位点的有效等位基因数为1.343~13.954个；观测杂合度(Ho)为0.000~1.0000，平均观测杂合度为0.575;期望杂合度(He)为0.260~0.902，平均期望杂合度为0.706；多态信息含量(PIC)为0.304~0.923。在所有位点中，高度多态性位点（PIC>0.5）有109个，中度多态性位点（0.5>PIC>0.25）有10个；连锁不平衡检测结果显示，

6、位点间无连锁不平衡现象；经Bonferroni校正后，有22个位点显著偏离哈迪-温伯格平衡。此外，分析了43对引物在近缘种金乌贼（Sepiaesculenta）、长蛸（Octopusminor）、真蛸（Octopusvulgaris）、卵蛸（Amphioctopusovulum）、日本无针乌贼（Sepiellajaponica）中的通用性情况，结果显示在金乌贼、长蛸、真蛸、卵蛸和日本无针乌贼中分别有5个、8个、7个、2个和1个微卫星标记成功扩增，表明这些位点的通用性较低，近缘物种的微卫星引物有待进一步开发。本研究开发的短蛸微卫星标记将为其种群遗传结构研究提供重要工具，有助

7、于其种质资源保护与管理。二、短蛸微卫星多重PCR体系的构建及交配模式分析本研究选取12对高多态性微卫星标记进行优化组合，构建了4组三重PCR体系，对短蛸4个母本、104个子代及19个候选父本进行亲权鉴定，分析其交配模式。结果表明，构建的4组三重PCR体系可有效鉴定短蛸的亲权关系，104个子I上海海洋大学硕士学位论文代鉴定率为94.23%；♀1组样品鉴定出12个子代，父本数为3个，♀2组样品鉴定出40个子代，父本数为7个，♀3组样品鉴定出19个子代，父本数为2个，♀4组样品鉴定出27个子代，父本数为4个；并且父本♂2，♂3，♂7