学位论文 th1炎症在慢性变应原暴露诱导小鼠气道重塑中的作用和天龙咳喘灵抗重塑分子机制的探讨

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1、广州医学院硕士学位论文Th1炎症在慢性变应原暴露诱导小鼠气道重塑中的作用和天龙咳喘灵抗重塑分子机制的探讨姓名：罗永峰申请学位级别：硕士专业：呼吸内科学指导教师：徐军20070625英文缩略a-SMAa-smoothmuscleActinAHRairwayhyperresponsivenessASMCsairwaysmoothmusclecellsBUDBudesonideBALFbronchoalveolarlavagefluidEIBExercise．inducedbronchoconstdctionEOSeosinophilsER

2、KsextracellularsignalregulatedkinaseFflOWIFNq'interferonyILinterleukinMChMetacholineOVAovalbuminPpressurePaoairwayopeningpressurePEFpeakexpiratoryflowPenhenhancedpausePIFpcakinspiratoryflowPplpleuralpressu∞PtptranspulmonarypressureRIlungresistanceSTATsignaltmusdueersand

3、activatorsoftranscriptionThThelpercellVSMCsvascularsmoothmusclecellsWBPWholeBodyPlethysmograph洳平滑肌肌动蛋白气道高反应性气道平滑肌细胞布地奈德支气管肺泡灌洗液运动诱发支气管收缩嗜酸性粒细胞胞外信号调节激酶流量T干扰素白细胞介素乙酰甲胆碱卵清蛋白压力气道开放压最大呼气流量增强呼气间歇最大吸气流量胸膜腔压力跨肺压肺阻力信号传导与转录激活因子辅助性T细胞血管平滑肌细胞全身体积描记仪广州医学院硕七学位论文Thl炎症在慢性变应原暴露诱导小鼠气道重塑中

4、的作用和天龙咳喘灵抗重塑分子机制的探讨硕士研究生：导师：罗永峰徐军教授中文摘要研究背景和目的：慢性气道炎症、气道重塑和气道高反应性是慢性哮喘共有的特征。与传统Th2／Thl平衡理论相驳，最近众多研究均显示Thl炎症可能在慢性变应性哮喘发展过程中发挥了重要的作用。因此，本实验利用能够在体示踪气道平滑肌细胞和肌纤维母细胞增殖活化的SMA．Cre／R26R转基因报告小鼠，通过慢性尘螨暴露建立慢性哮喘模型研究Thl炎症在气道重塑和气道高反应性(AHR)当中的地位。天龙咳喘灵是根据我院广东省名中医邱志楠教授临床验方研制的中药复方制剂，临床和体外

5、实验提示其具有治疗气道高反应及抗肌纤维母细胞活化的作用。本研究在建立慢性哮喘小鼠模型及气道反应性体积描记法无创动态监测技术平台基础上，深入探讨并评价了该中药方剂抗重塑效应的特点，以及与表面激素发挥疗效的不同控制环节和可能的临床意义。研究内容和方法：第一部分小鼠气道反应性检测方法的建立、应用和比较第一节小鼠有创和无创气道反应性检测方法对小鼠进行连续18天的OVA雾化激发制造慢性哮喘动物模型，分别使用有创和无创两种方法对小鼠气道反应性进行检测，从中分析两者及其相应参数Rl和PerIll在反映气道阻力当中的相关性。第二节小鼠运动激发实验平台

6、跑步机的建立制造小鼠跑步机，为研究哮喘运动激发试验搭建相应平台。第二部分慢性尘螨变应原暴露诱导小鼠气道炎症的性质、及相关的气道重塑和气广州医学院硕一f：学位论文道高反应性的研究1．使用本实验室建立的能够在体示踪气道平滑肌细胞和肌纤维母细胞增殖活化的SMA．Cre／R26R转基因报告小鼠，连续经鼻滴入尘螨溶液60天制作慢性变应原暴露小鼠模型；2．末次滴鼻24小时后利用有创性方法检测气道反应性，支气管肺泡灌洗(BALF)，计算BALF中细胞总数、分类计数；3．肺组织病理切片分别进行HE和LacZ染色，观察各组小鼠肺组织的病理变化；4．提取

7、小鼠肺脏蛋白，WesternBlot检测d．SMA表达变化；5．分离培养各组小鼠脾脏淋巴细胞，以佛波酯、离子霉素刺激培养的脾细胞，莫能霉素作为阻断剂，流式细胞术检测分泌IL4和IFN-7的CD3+cD4+脾细胞比例，检测肺匀浆上清细胞因子IL-4和IFN吖的水平。第三部分中药天龙咳喘灵水煎剂对支气管哮喘小鼠气道重塑的影响及其机制1．小鼠随机分为盐水对照组，模型组，天龙咳喘灵水煎剂治疗组和BUD治疗组。除正常对照组，其它各组小鼠分别于第0、14日以OVA液腹腔注射致敏，第24天始每天给予雾化OVA溶液作激发，连续18天。每次激发后6小时

8、，天龙咳喘灵水煎剂治疗组小鼠接受雾化3％中药天龙咳喘灵生理盐水治疗，激素治疗组接受1．67mg／mlBUD雾化作治疗；2．采用无g,Jd,鼠体积描记仪分别对最后一次激发后24小时(第41天)和96小时(第44天)小鼠的气