小麦酯酶农药速测卡的研制和应用

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1、广西大学硕士学位论文小麦酯酶农药速测卡的研制和应用姓名：刘文君申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：龙明华20070628小麦酯酶农药速测卡的研制和应用摘要检测有机磷农药残留量的方法主要有：色谱法、光谱法、酶抑制法、免疫法和化学发光法等。其中酶抑制法以其快速、简易、灵敏度高等优点，在检测过程中发挥着越来越重要的作用。本试验根据酶抑制法原理，在底物筛选和小麦酯酶纯化的基础上，对农药速测卡进行试探性的研制，并对速测卡的使用方法、使用范围以及存在的问题进行分析，取得以下结果：1．2．6一二氯靛酚乙酸酯和固兰8盐都可以作为酶

2、抑制法的底物，因为它们都可以在小麦酯酶的催化作用下直接或间接地发生显色反应。但是，相比而言，2．6一二氯靛酚乙酸酯作为底物更具有优越性，主要表现在：第一、底物和生成物都具有良好的稳定性，不易分解而影响检测结果的准确性；第二、酶促反应条件比较合理，最适酶促反应温度为35"C，最适pH=7．0，两者都在正常范围内，而不是太高或太低；第三、定量检测主要是利用抑制率与农药浓度对数值的线性关系来检测残留量，相关系数越大，表示检测值越接近实际值。2．6一二氯靛酚乙酸酪为底物时，R2=0．9911，要远远大于以固兰B盐为底物时的R2

3、；最后，用添加农药法测定的回收率高，表明2，6一二氯靛酚乙酸酯为底物时，检测限更小。2．酶活性的高低是关系检测方法灵敏度和稳定性的关键因素之一。本试验采用DEAE--52离子交换层析法对小麦酯酶进行分离纯化。结果表明：同样重的干纯化酶粉和干原酶粉相比，前者蛋白质含量较高，约是后者的2．86倍；并且纯化后酶活性与原酶活性相比提高了近1倍。3．本试验采用先浸泡，再真空低温干燥，最后粘贴的方法对农药速测卡进行了试探性的研制，并对速测卡的灵敏度进行了鉴定。结果表明，此速测卡的灵敏度并不高，其原因可能在于酶活性偏低，或研制过程中

4、酶活性丧失严重。因此，仍需探索更优良的酶纯化方法和更完善的速测卡研制技术。关键词：小麦酯酶农药速测卡DEAE--52离子交换层析法酶抑制法2，6一二氯靛酚乙酸酯分离纯化抑制率检测灵敏度DeveIopmentandapplicationofawheat—EsterasepaperfordeterminingpesticideresiduesABSTRACTManybiologicalandchemicalmethodsareusedtodetermineOrganophosphoruspesticidesresidues

5、infruitsandvegetables．suchasChromatograpy,Spectrometry,En巧meInhibition，ImmunoassayandChemicalluminaryandSOon．Butenzymeinhibitionisplayingveryimportantroleindeterminingprocess，becauseofadvantagesofrapidness，simplicityandhighersensitivity．Accordingtotheprincipleof

6、Enzymeinhibition，thisexperimentcomparedadvantagesbetweenthesetwosubstrates，andpurifiedwheatesterasewiththemethodofIonExchangeChromatography,andtriedtodeveloprapidtestpaper．Besides，italsoexplainedanddiscussedmanyquestionswhichwerefoundintheprocessofusingrapidtest

7、papeLTheresultsweredescribedasbellow：1．2,6·dichioro·benzennone·Indopheny·lacetateandfastblueBsaltaretwokindsofcommonsubstratesinEnzymeinhibition，bothofwhichcouldproductcoloringreactionatthefunctionofwheatesterase．But，theresultconfirmedthat2．6-dichloro·benzenone-

8、indopheny-lacetateisbetterusedassubstratesthanfastblueBsalt，themainadvantagesinclude：Firstly,substrateandproducthavefinerstability；Secondly，thereactionconditionofwhea