骨髓间充质干细胞移植治疗薄型子宫内膜的实验研究

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1、中图分类号数!UDC鱼lQ博士学位论文学校代码!Q§圣圣密级公珏骨髓间充质干细胞移植治疗薄型子宫内膜的实验研究Theexperimenta!studyoftherapeuticeffectofbonemarrowmesenehymalstemcellstransplantationonthinendometrium作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：副指导教师：赵静临床医学妇产科学(生殖医学)湘雅医院李艳萍教授刘冬娥教授文答辩日期地2=￡=(‘答辩委员会主席．釜鱼垒畲中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位

2、论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：叁鱼EIgq：竺堡一年』月兰日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学

3、位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作⋯：扭新签名蟑嗍型年』月!曰中南大学博士学位论文英文摘要摘要第一章大鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定目的：建立一种简便稳定的体外分离、扩增及鉴定Sprague．Dawley(SD)大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)I拘方法。方法：采用全骨髓细胞贴壁培养法体外分离、培养和扩增雄性SD大鼠的BMSCs，应用MTT方法检测其生长曲线，流式细胞仪检测BMSCs表面标

4、记，向骨细胞、脂肪细胞定向诱导分化，对培养、纯化的BMSCs进行鉴定，并冻存和解冻BMSCs，观察生长状态。结果：全骨髓贴壁培养法获得的BMSCs可贴壁生长，原代细胞呈椭圆形，集落式生长，经过传代，细胞形态趋于一致，呈纤维细胞样生长。P1，P3，P5BMSCs生长曲线呈S型，生长迅速；细胞表面抗原CD90表达为阳性，CD34，CD45表达为阴性；在适宜的诱导条件下，BMSCs可成功分化为骨细胞、脂肪细胞；经过冻存复苏后的BMSCs生长特点与未冻存BMSCs无明显差异。结论：全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs体外扩增能力强，纯度高，可用于进一步

5、研究，是获得BMSCs的简便高效的方法。关键词：骨髓间充质干细胞；全骨髓贴壁法；细胞培养第二章SD大鼠薄型子宫内膜模型的建立和鉴定目的：建立并鉴定大鼠薄型子宫内膜模型，为临床开展干细胞移植提供实验基础。方法：1．220．2809未交配雌性SD大鼠12只随机分为两组。造模组用无水乙醇宫腔内注射约5min，对照组给予生理盐水。2．于术后三个动情周期，行HE染色观察子宫内膜组织形态变化，测量子宫内膜厚度，免疫组化检测子宫内膜细胞标志蛋白角蛋白、波形蛋白及子宫内膜容受性标志蛋白整合素Y3的表达情况。结果：1．造模组大鼠子宫内膜腺体稀疏，基质水肿，部

6、分区域肉芽组中南大学博士学位论文英文摘要织样增生，厚度明显薄于对照组(P

7、为正常对照组(正常大鼠不予任何处理，n=12)，PBS对照组(模型鼠给予PBS移植，n=12)，静脉早移植组(于建立模型6．8小时后经尾静脉移植BMSCs1×107／只，n=12)，宫腔早移植组(于建立模型6．8小时后宫腔原位移植BMSCs1x107／只，n=12)，静脉晚移植组(于建立模型12天后经尾静脉移植BMSCs1×107／只，n=12)，宫腔晚移植组(于建立模型12天后宫腔原位移植BMSCs1×107／只，n=12)。于移植后12天处死大鼠并留子宫内膜组织标本。2．HE染色检测子宫内膜组织结构，测量子宫内膜厚度；免疫组化方法及免疫

8、印迹法检测子宫内膜细胞标志蛋白角蛋白、波形蛋白和CD34的表达，以及子宫内膜容受性标志蛋白整合素avl33和LIF的表达。3．免疫组织化学法及免疫印迹法检测各组子宫内膜BrdU的