光皮桦ssr分子标记体系的建立

《光皮桦ssr分子标记体系的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、浙江林学院学报2010，27(3)：464—469JournalofZhejiangForestryCollege光皮桦SSR分子标记体系的建立尤卫艳，黄华宏，程龙军，童再康，朱玉球(浙江林学院林业与生物技术学院，浙江临安3l1300)摘要：采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)一硅珠法提取光皮桦Betul0Z“ininFa嫩叶DNA，利用近缘种日本白桦丑platyphyllavat．aponica和欧洲白桦B．pendula的引物，建立光皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系。在体系建立过程中，采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析、结果表明：在20L反应体

2、系中，模板DNA用量、M浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)~"度、引物浓度、DNA聚合酶用量分别为6Ong，1．500mmo]·L4，0．175mm01．L～，2．500mmo1·L～，j．0X16．67nkat时结果最好：引物退火温度比日本白桦扩增时提高l℃时效果佳。PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序．对引物的通用性做进一步检验，序列经比对后得到的与原物种序列相似度(maxident值)均在95．0％以上、可见，近缘种日本白桦和欧洲白桦的SSR引物可以在光皮桦上应用图7表2参17关键词：林木育种学；光皮桦：简单重复序列(SSR)分子

3、标记中图分类号：$722文献标志码：A文章编号：1000—5692(2010)03—0464—06AnSSRmolecularlabelingtechniquesystemforBetulaluminiferaYOUWei·yan，HUANGHua—hong，CHENGLong-jun，TONGZai—kang，ZHUYu—qiu(SchoolofForestryandBiotechnology，ZhejiangForestryCollege，Lin’all311300，Zhejiang，China)Abstract：Tofindtheoptimalsimplesequence~'e

4、peats(SSR)systemforBetulaluminifera，thecetyhrimethyl—ammoniumbromide(CTAB)methodwasusedtoextractDNAfromtenderleaves．usingtheknownprimersfromrelatedspecies：B．plat)phyllavar．japonicaandB．pendula．Then，onefactorwaschangedatatimetooptimizethepolymerasechainreaction(PCR)．Next，PolyaerylamideGelElectro

5、phoresis(PAGE)wasusedtodetecttheamplifiedproductswiththreeprimers’segmentsrandomlyselectedfromthirty—sixpairsofprimersandsequencedtofurtherchecktheuniversalityoftheprimer．Resultsshowedthatinavolumeof20IxL，theoptimalreactionsystemwas60ngtemplateDNA，1．500mmol·L一Mg，0．175mmol·L一deoxyri-bonucleotide

6、triphosphate(dNTP)s，2．500mmol·L～primer，and1．0X16．67nkatpolymerase．Corn—paredwithB．platyphyllavar．japonicaandB．pendula，theoptimalannealingtemperatureoftheprimerwaslochigher．TheblastresultsfromprimerAF310851，AB084479，andAB084480showedthatthevaluesofmaxidentwereallabove95．0％．ThisindicatedthattheSS

7、RprimersofbirchcouldbeusedwithB．1u—minifera．[Ch，7fig．2tab．17ref．]Keywords：foresttreebreeding；Betulaluminifera；simplesequencerepeats(SSR)marker光皮桦Betulaluminifera属桦木科Betulaceae桦木属Betula⋯。为中国特有优良用材树种，天然分布于秦岭淮河流域以南的河南、四川、贵州、云南、安徽、湖北、