蛋白质组学技术筛选弥漫大b细胞淋巴瘤耐药相关蛋白的初步研究

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1、中图分类号J墨羔UDC6lO博士学位论文学校代码—105—33密级妞蛋白质组学技术筛选弥漫大B细胞淋巴瘸耐药相关蛋白的初步研究(ApreliminarystudyOnproteomiesscreeningofdiffuselargeB-cellbjmphomaresistance-associatedprotein)作者姓名：学科专业}研究方向：学院(系、所)：指导教师：刘轶平临床医学肿瘤学湘雅医院钟美佐教授答辩委员会主席丝拼Q中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师

2、指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：曼：l坦．日期：趋立年』月五日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采

3、用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。本课题受如下基金资助：教育部博士点基金(2．00902E+13)II蛋白质组学技术筛选弥漫大B细胞淋巴瘤耐药相关蛋白的初步研究摘要．淋巴瘤是我国常见恶性肿瘤，可分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma，HL)和非霍奇金淋巴瘤(non—Hodgldnlymphoma，NHL)两大类，我国淋巴瘤患者中约90％为非霍奇金淋巴瘤，而弥漫大B细胞淋巴瘤(D

4、iffuselargeB-celllymphoma，DLBCL)是NHL中最常见的亚型，约占全部NHL的30,-40％。目前化疗仍然是治疗DLBCL的主要措施，但其整体5年生存率仍不足50％，临床上DLBCL难治的原因主要是肿瘤细胞对化疗药物产生耐药，故研究DLBCL耐药机制是提高DLBCL患者疗效的关键。对化疗敏感性不同的DLBCL组织进行差异蛋白质组学分析，高通量地筛选凋亡及耐药相关蛋白，可望发现与化疗耐药相关的蛋白，为筛选肿瘤耐药的分子标志物及逆转耐药的靶向治疗提供新的思路。第一章化疗敏感性

5、不同的DLBCL组织差异表达蛋白的蛋白质组学研究目的：本研究通过蛋白质组学方法分离鉴定CHOP方案化疗高敏感组和低敏感组的DLBCL组织的差异表达蛋白，为确定在淋巴瘤化疗增敏中其关键作用的分子以及化疗敏感性预测的标志物提供重要依据。方法：收集DLBCL新鲜组织标本，根据CHOP化疗药物敏感性试验分为化疗低敏感组和高敏感组，采用2-DE+MALDI．TOF．TOF．MSIII方法进行两组间差异蛋白质鉴定，获得了DLBCL化疗耐药相关蛋白差异表达谱，并对鉴定的差异表达分子进行生物信息学分析。对其中部分

6、差异表达蛋白(EZR、PLEK、GSTPl和HSPBl)的表达水平进行WesternBlm验证，观察这四种蛋白的表达与DLBCL的化疗敏感性的关系。‘结果：蛋白质组学方法获得了CHOP方案化疗高敏感组和低敏感组的DLBCL组织的差异蛋白表达谱，并鉴定了其中19个差异表达蛋白，包括：S100A9、醛脱氢酶1、膜联蛋白A5、埃兹蛋白(ezrin)、plecstrin(PLEK)、组蛋白H2A．2、14．kDa组氨酸磷酸酶、14．3．3￡、61．kD肿瘤相关抗原蛋白、胶原蛋白0【1、血清铁蛋白、6．磷酸

7、化葡糖酸内酯酶、RabGDP解离抑制因子、冠蛋白样蛋白、人异质性胞核核糖核蛋白H3同工型a、前体RNA处理因子19、3．羟酰基辅酶A脱氢酶、谷胱甘肽S．转硫酶及热休克蛋白27。生物信息学分析显示这些蛋白功能涉及代谢相关酶，细胞通讯，细胞周期，免疫反应，应激反应，细胞结构，分子伴侣，基因稳定性，蛋白合成及转运等相关信号通路等，并且部分分子可能通过信号转导网络相互作用。进一步应用WestemBlot对两组中四个蛋白EZR、PLEK、GSTPl和HSPB1差异表达情况进行验证，结果显示EZR和PLEK在

8、化疗高敏感组中的表达高于化疗低敏感组，而GSTPl和HSPBl在化疗高敏感组中的表达低于化疗低敏感组。证明蛋白质组研究结果有较好的重复性，所检测的四种蛋白在化疗敏感性方面具有重要意义。结论：1．2-DE结合质谱获得了DLBCL组织CHOP方案化疗耐药相关差异蛋白表达谱；2．获得了19个与DLBCL组织CHOP方案化疗耐药相关差异蛋白，这些蛋白功能涉及代谢相关酶，细胞通讯，细胞周期，应激反应，细胞结构，分子伴侣，基因稳定性，蛋白合成及转运等相关信号通路等，部分分子可能通过信号转导网络