蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化

《蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、《中国图书资料分类法》分类号：R743.35单位代码：10660学号：S100364贵阳医学院2013届硕士学位论文蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化研究生：符永健导师：王迪芬教授施贤清副教授年级：2010级专业：麻醉学.2013年3月16日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„10讨论„„„„„„„„„„„„„„20参考文献„„„„„„„„„„„„„24英文摘要„„„„„„

2、„„„„„„„27致谢„„„„„„„„„„„„„„29略缩词表„„„„„„„„„„„„„30论文原创性声明„„„„„„„„„„31附：综述„„„„„„„„„„„„322贵阳医学院2013届硕士研究生论文蛛网膜下腔出血后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化专业：麻醉学研究生：符永健导师：王迪芬施贤清摘要目的:通过全细胞膜片钳技术研究蛛网膜下腔出血（SAH）后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流的变化情况。方法：40只新西兰大白兔随机分为5组，每组8只。分别为蛛网膜下腔出血（SAH）后24小时（S1）组、48小时（S2）组、

3、72小时(S3)组、假手术（C）组和正常（N）组。S1-S3组在静脉麻醉下经枕大池注入非抗凝的自体动脉血(1ml/kg)复制SAH模型，C组经枕大池注入等量的37℃的生理盐水，N组不予任何操作。S1-S3组分别在SAH后24小时、48小时和72小时后在静脉麻醉下取出基底动脉，C组在注入生理盐水后72小时取出基底动脉，N组直接取基底动脉。用酶溶液Ⅰ(木瓜蛋白酶0.5mg/ml、二硫赤藓糖醇1mg/ml)和酶溶液Ⅱ（XI型胶原酶1mg/ml）分两步进行酶消化分离各组基底动脉平滑肌细胞。通过全细胞膜片钳技术记录各组细胞膜电容、电压依赖性钙离子

4、通道电流,在细胞浴液中加入电压依赖性钙离子通道阻断剂硝苯地平（1ｕmol/l），验证各组所记录到的电流是否为电压依赖性钙离子通道电流。结果：各组细胞数量、大小、膜电容无明显差异（P>0.05），S1-S3组电压依赖性钙离子通道电流较C组和N组增大（P<0.05），与S1和S2组相比，S3组电流增大更为显著（P<0.01），C组和N组电流无明显差异（P>0.05）。钙离子通道阻断剂硝苯地平能够有效抑制各组电压依赖性钙离子通道电流(P>0.05)。结论：蛛网膜下腔出血（SAH）后基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流增大，以S3组电流增

5、大最为显著。硝苯地平能够有效抑制各组电压依赖性钙离子通道电流。关键词：蛛网膜下腔出血基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流3贵阳医学院2013届硕士研究生论文前言蛛网膜下腔出血（subarachnoidhemorrhage,SAH）是神经外科常见病，SAH后脑血管痉挛(cerebralvasospasm,CVS)是其严重并发症，是致死致残主要病因之一。因此SAH后CVS的发生机制的研究对早期防治CVS有重要意义，目前人们对CVS的机制仍没有完全清楚，涉及到SAH后CVS发生机制的研究较少,特别是对于SAH后脑血管平滑肌内离子通道功能

6、及相关电生理改变情况的研究报道2+更少。有研究表明：SAH后各种离子通道如钾、钙离子(calciumionCa)通道功能失调，进而引起脑血管平滑肌细胞(smoothmusclecellsSMCs)膜电位去极化及引起钙离子通道开放概率增加，使钙离子内流增加，引起脑血管平滑肌收缩，［1-3］造成CVS。而功能性电压依赖性钙离子通道(voltage-dependentcalcium2+channelsVDCCs)是血管平滑肌细胞外Ca流入细胞内的主要通道，通过调节平［4-6］2+滑肌细胞内钙离子浓度来调控血管平滑肌的舒缩性能。Ca通过电压依赖

7、性钙离子通道进入血管平滑肌细胞将会引起通道电流的改变，使平滑肌张力增加，［7］进而引起平滑肌收缩。因此电压依赖性钙离子通道在维持血管平滑肌张力上有重要作用。CVS是SAH后严重的并发症，发生率高，各种实验模型也证实了SAH［8-9］后CVS的高发生率。国外有研究表明在痉挛的基底动脉(basilararteryBA)［10-11］平滑肌细胞上钙离子通道蛋白的表达发生改变，关于SAH后脑血管平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流变化情况的研究较少，SAH后早期基底动脉平滑肌细胞电压依赖性钙离子通道电流的研究目前国内外尚无人报道。因此本实验通过枕

8、大池注入非肝素化自体动脉血的方法复制兔SAH模型，采用两步法急性酶消化分离技术分离出脑基底动脉平滑肌细胞，通过全细胞膜片钳技术研究SAH后24小时(S1)、48小时(S2)、72小时(S3)组与假手术组(C