蓝萼乙素抑制小胶质细胞炎症反应及其机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目蓝萼乙素抑制小胶质细胞炎症反应及其机制研究研究生姓名陶荔指导教师姓名镇学初教授专业名称药理学研究方向神经药理学论文提交日期2013年5月蓝萼乙素抑制小胶质细胞炎症反应及其机制研究中文摘要中文摘要目的：研究蓝萼乙素（GlaucocalyxinB,GLB）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激的小胶质细胞的抗炎作用及其作用机制，探讨蓝萼乙素对炎症介质引起的神经毒性的保护作用。方法：利用脂多糖刺激的BV-2细胞和原代小胶质细胞，分别用Griess法和E

2、LISA法测定细胞上清液中一氧化氮（NO）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的浓度，MTT法测定细胞活性；Real-timePCR法检测炎症因子iNOS、COX2、TNF-α和IL-1β的基因表达情况；Westernblot法检测iNOS、COX2蛋白表达，IκBα的磷酸化和降解，MAPKs蛋白磷酸化；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）的水平；免疫荧光法观察核转录因子NF-κB的核转位情况；小胶质细胞与神经元共培养方法检测蓝萼乙素对神经元活性的影响。结果：蓝萼乙素能够显著抑制激活的BV-2细胞和原代小胶质细胞中NO以及TNF

3、-α的释放，并且能显著降低细胞内ROS的水平；蓝萼乙素能显著抑制炎症因子iNOS、COX2、TNF-α和IL-1βmRNA水平的表达，并且能够降低iNOS和COX2蛋白水平的表达；在LPS诱导的BV-2细胞中，蓝萼乙素可以抑制IκBα的磷酸化和降解，NF-κB的核转位以及p38MAPK的磷酸化；蓝萼乙素能降低激活的小胶质细胞对原代神经元的细胞毒性作用。结论：蓝萼乙素通过抑制小胶质细胞转录因子NF-κB的核转位以及p38MAPK的磷酸化而产生抗炎作用并对炎症介质介导的神经毒性具有保护作用。关键词：蓝萼乙素；小胶质细胞；炎症

4、反应；神经保护作者：陶荔指导教师：镇学初教授I英文摘要蓝萼乙素抑制小胶质细胞炎症反应及其机制研究GlaucocalyxinBinhibitsglialinflammatoryactivationviasurppressionofNF-κBpathwayAbstractObjective:Toinvestigatetheanti-inflammatoryeffectofglaucocalyxinB(GLB)inlipopolysaccharide(LPS)-stimulatedmicrogliacellsandneurot

5、oxicity.Methods:Inthisstudy,weuseLPS-stimulatedBV-2andprimarymicrogliacellsmodeltoinvestigatetheanti-inflammatorypropertiesofGLB.Theproductionofnitricoxide(NO)andtumornecrosisfactor(TNF)-αinculturemediumwasevaluatedbyGriessandELISAassay,andcellviabilitywasmeasure

6、dbyMTTassay;thegeneexpressionofinducibleNOsynthase(iNOS),cyclooxygenase(COX)-2,tumornecrosisfactor(TNF)-αandinterleukin(IL)-1βwereevaluatedbyReal-timePCR;theproteinexpressionlevelofiNOS,COX-2,phosphorylationanddegradationofIκBα,phosphorylationofmitogen-activatedp

7、roteinkinase(MAPKs)wasdeterminedbyWesternblotanalysis;Thegenerationofintracellularreactiveoxygenspecies(ROS)wasdetectedbyDCFH-DAusingflowcytometry;NF-κBnucleartranslocationwasanalyzedbyimmunofluorescence;amicroglia/neuroncoculturesystemwasappliedtostudytheneuropr

8、otectiveeffectofGLB.Results:GlaucocalyxinBsignificantlysuppressedtheproductionofNOandTNF-αinactivatedBV-2andprimarymicrogliacells,italsodecreasedthelevelofintr