苹果属种质资源抗寒性鉴定及抗寒基因fad2和gpat的克隆和表达分析

《苹果属种质资源抗寒性鉴定及抗寒基因fad2和gpat的克隆和表达分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、万方数据EvaluationoncoldhardinessofMalusgermplasmandcoldhardinessgenesFAD2andGPATcloningandexpressionanalysis。上。heSlSsubmittedtoQingdaoAgt／cultumlUniversityInFulfillmentoftheRequirememfOrtheDegreeof—MasterofAgronomyLiuXiuli(DepartmentofHorticulture)Supervisor：ZhuJunQingdao．ChinaJune，2013万方数据独创性声明本人声

2、明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：剖铸习时间：≥。J弓年多月≥&关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播

3、学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：杏’l启萼_导师签名：时间：≥o哆年石月■泊时间：≯，≥年‘月五细万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要捅要本试验p7,44种苹果砧木的一年生休眠枝条为试材，进行0℃、．20℃、．25℃、．30℃、．35℃、．40℃人工低温冷冻处理，应用电导率法测定供试枝条在不同低温下细胞膜透性的变化，采用方程拟合求得半致死温度，对44种苹果砧木抗寒性的强弱进行比较。分别以山定子和嘎拉为试材，克隆得到油酸去饱和酶基因^砀尉D2和甘油．3．磷酸酰基转移酶基因MdGPAT，并对这两个基因进行生物信息学分析和表达分析。试验研究结果如下

4、：1．供试44种苹果砧木随着温度的降低砧木枝条的相对电导率逐渐升高，通过方程拟合求出半致死温度，半致死温度最低的为山定子，最高的为沧江海棠，分别为．45．7624。C、．26．5283℃。将所测砧木抗寒性分为5个等级，分别为抗寒性强、抗寒性较强、抗寒性中、抗寒性较弱、抗寒性弱。2．采用RT-PcR技术，首次从山定子中克隆到油酸去饱和酸酶基因，该基因命名为MbFAD2。其最大开放阅读框为1149bp，编码个382个氨基酸，在GenBank的登陆号为KC702671。在NCBI上经过BLASTp比对分析发现该基因属于尉骆，池家族。经过DNAMAN6．0软件分析的出该基因有三个高度保守的组氨

5、酸簇，分别为HECGHH(HisI区)、HRRHH(HisII区)和HVAHH(HisⅢ区)。二级结构分析表明，MbFAD2蛋白分子中，Q．螺旋、随机卷曲和不规则卷曲分别为35．86％、16．23％、47．91％，系统进化树关系分析表明，MbFAD2与橡胶树和毛白杨的亲缘关系最近，共同形成一个分支，亲源关系最远的为玉米和中间锦鸡儿。MbFAD2进行蛋白跨膜区分析发现该蛋白具有六个跨膜区域。3．采用RT-PCR技术，首次从嘎拉叶片的cDNA中克隆得到甘油三磷酸酰基转移酶基因，该基因命名为MdGPAT。其最大开放阅读框为1365bp，编码个454个氨基酸，在GenBan墩aO登陆号为KC6

6、93008。在NcBI上经过BLASTp比对分析发现该基因属于上尸幽r基因超级家族。经过DNAMAN6．O软件分析的该基因的氨基酸序列具有wiapsggrdrp的保守区域。二级结构分析表明，MdGPA骚白分子中，扩展链、c【．螺旋结构和无规则卷曲分别占50．44％、39．43％、10．13％。系统进化树关系分析表明，M，硎鸭南瓜的亲缘关系最近，共同形成一个分支，亲源关系最远的为番茄和玉米。MdGPA隧行蛋白跨膜区分析发现该蛋白不具有跨膜区域。4．通过实时荧光定量表达研究表明，MbFAD2在山定子中的根、茎、叶和花中均有表达，其中在花中的表达量最高，其次是叶片。在4"C低温胁迫处理植株的

7、过程中，MbFAD2在叶片中的表达量随着处理时间的增加表现为先升高后下降的趋势，其中24h时该基因表达量最高，48h后该基因表达量下降；该基因茎中的表达情况与叶中的表达情况不同，茎中该基因的表达是随着处理时间的增加表达量逐渐升高。在Oh．24h中，该万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要基因在山定子叶中的表达量比茎中的表达量高，而在48h．72h中，茎中该基因的表达量比叶中的高。本试验说明该基因的表达量与低温有关，该基因在叶中表达较茎敏感，而在茎