白藜芦醇复合磷脂脂质体的制备及其体外抗肿瘤作用研究

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1、中图分类号UDCI圆44610硕士学位论文学校代码密级10533白藜芦醇复合磷脂脂质体的制备及其体外抗肿瘤作用研究Preparationofresveratrolphospholipidcompositeliposomesandtheirinvitroanti—·tumoractivityinvestigation作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：张秀珍药剂学新剂型药学院陈玉祥教授论文答辩日期皇m：上兰占答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地

2、方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：且年上月血日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：j丑年上月尘日白藜芦醇复合磷11日

3、一llm匕质体的制备及其体外抗肿瘤作用研究摘要一、目的通过对白藜芦醇(RESVERATROL，Res)的处方前研究，制备和初步评价Res复合磷脂脂质体，比较其与单一磷脂脂质体在稳定性和其他方面的优势，并初步考察Res复合磷脂脂质体的体外抗肿瘤活性，为其体内药物动力学研究提供参考，为Res新剂型研究提供了新的思路和研究方法。二、方法1、建立Res的HPLC含量测定方法，探讨Res复合磷脂脂质体包封率的测定方法，测定Res在正辛醇／水中的油水分配系数。2、筛选Res复合磷脂脂质体的制备方法，并通过单因素实验和正交设计实验，以包封率指标进行工艺优化，确定最佳处方。3、扫描电镜观察Res复合磷脂

4、脂质体的形态分布，马尔文粒度分析仪测定其粒径大小和Zeta电位，体外释放实验来考察Res复合磷脂脂质体的稳定性和体外释药特点。4、MTT法检测Res复合磷脂脂质体对肝癌HepG2和肺癌A549在24h、48h和72h的生长抑制作用并计算IC50值；PI单标流式细胞术考察Res复合磷脂脂质体对不同肿瘤细胞周期的影响；Hochest33342单染色法观察其对不同肿瘤细胞凋亡形态的影响。三、结果1、结果表明Res在l'--2599／mL范围内线性关系良好，且各种辅料对其测定基本没有干扰；以PH7．4的PBS液为洗脱液，葡聚糖凝胶柱法可以很好的分离Res复合磷脂脂质体和游离Res；在37℃下，R

5、es的油水分配系数为1．50。2、采用薄膜．超声分散法制备可以得到较高的包封率，通过单因素试验和正交设计试验筛选的最优处方是：磷脂浓度为4％，HSPC／SPC为1：6，药脂比为1：15，且胆固醇与磷脂比为1：3。该工艺条件下，平均包封率可达82．47％，粒径分布均匀，批间差异较小。3、制备的脂质体外形圆整，大小均一，呈类球形；平均粒径为89nm，电位为．43．2mv，Res复合磷脂脂质体有一定的缓释作用，体外释放时36h可达平衡，累积释放率为81．3％，且其对血浆的稳定性要优于Res大豆磷脂脂质体。4、Res复合磷脂脂质体对肝癌HepG2和肺癌A549的抑制作用呈时间和浓度依赖性，对两种

6、癌细胞细胞周期的影响均是S期阻滞作用。四、结论1、HPLC法准确，灵敏，操作方便，提高了Res的定量检测的效率；油水分配系数测定结果提示Res脂溶性较强，极性较弱，适合制成脂质体制剂。III2、薄膜分散法操作简单，在实验室易于完成，最佳处方制得的脂质体形态圆整，分布均匀，包封率高，稳定性好。3、Res复合磷脂脂质体对肝癌HepG2和肺癌A549有较强的生长抑制作用，且作用强度呈时间和浓度依赖性，另外对细胞凋亡的诱导还具有一定的周期特异性。图19幅，表18个，参考文献38篇。关键词：白藜芦醇；复合磷脂脂质体；处方工艺；质量评价；抗肿瘤作用分类号：R944Preparationofresve

7、ratrolphospholipidcompositeliposomesandtheirinvitroanti—tumoractivityinvestigationABSTRACTOBJECTIVEBasedonthepre-prescriptionstudyofresveratrol，thestudywasaimtoprepareresveratrolliposomecomposedoftwophospholipids，andes