长白山人参水煎液中microRNA测序分析及其对气虚疲劳大鼠模型部分基因表达的影响

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：密级：UDC：长白山人参水煎液中microRNA测序分析及其对气虚疲劳大鼠模型部分基因表达的影响姓名：王文娟学号：2111548010院系：中药学院学位类型:学术学位专业：中药学研究方向：中药及复方药理和毒理的研究导师姓名：王颖芳论文提交日期：2018年3月31日论文答辩日期：2018年5月学位授予单位：广东药科大学二○一八年五月广东药科大学硕士研究生毕业论文MiRNASequencingofChangbaiMountainGinsengDecoctionandItsEffectonPartialTar

2、getGenesinRatswithQiDeficiencyCandidate：wenjuanWangStudentID：2111548010Affiliation：SchoolofGuangdongPharmaceuticalUniversityAcademicDegreeApliedfor：MasterofChineseMedicineSpeciality：ScienceofChinesemateriamedicaSupervisor：Prof.YingfangWangAssistantSupervisor：DayofDefence：M

3、ay2018Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生毕业论文广东药科大学硕士研究生毕业论文长白山人参水煎液中MICRORNA测序分析及其对气虚疲劳大鼠模型部分基因表达的影响摘要目的：验证长白山人参水煎液中miRNA是否存在；验证空白组（正常大鼠）和处理组（灌胃人参水煎液）大鼠血液中人参miRNA的表达变化；通过建立气虚疲劳大鼠模型，验证人参miRNA对其靶基因的影响。方法：1.选用通用植物miRNA提取试剂盒法抽提人参水

4、煎液miRNA，经琼脂糖凝胶、Agilent2100Bioanalyzer检测其质量、纯度、完整性。TM并利用IlluminaHiSeq2500测序仪对人参水煎液进行测序分析，预测其中是否存在已知miRNA以及新的miRNA，以及利用RT-qPCR技术验证已知miRNA。2.6只大鼠分成2组（空白组和处理组），每组各3只，除正常组外，处理组灌胃2次/天，灌胃体积均为1ml/100g，连续给药30天。第31天，不给药，取各组血液，采用HiPureLiquidRNA/miRNAKit试剂盒进行血液RNA的提取，利用RT-qPCR技术检测验证大鼠

5、血液中含有的人参miRNA，以及通过生物信息学方法将测序得到的人参煎液中miRNA比对大鼠进行靶基因分析筛选。3.60只大鼠分成6组（人参水煎液组-R、去人参miRNA组-Q、人参miRNA组-M、人参皂苷组-Z、PBS组-P和空白组-K），每组10只，采用饮食失节+力竭游泳方法制造气虚疲劳大鼠模型，连续20I广东药科大学硕士研究生毕业论文天。第21天，给药，不游泳，取各材，测血清BUN、LDH和肝糖原的含量。并观测各组药物对大鼠的影响，通过RT-qPCR验证人参miRNA是否影响气虚疲劳大鼠免疫基因的表达变化。结果：1.利用琼脂糖凝胶和A

6、gilent2100Bioanalyzer检测，人参水煎液能有效提取miRNA。通过测序，最终鉴定人参煎液有71个miRNA家族。利用RT-qPCR验证人参水煎液中miR159、miR167、miR396、miR166、miR168、miR156、miR165、miR162、miR394均存在并表达量降低。2.利用RT-qPCR技术进一步地验证大鼠血液中确实存在人参miRNA，如miR159、miR167、miR393、miR156、miR8175、miR5072等。并通过靶基因预测的相关软件分析，发现人参中的部分miRNA对大鼠部分基因能

7、够达到高度匹配。如miR159与Mmp9，miR167与Bcl2l1，miR8175与Il4r，miR5072与Bcl2，miR158与Mapk14等。3.通过各项指标验证，发现本实验成功建立气虚疲劳大鼠模型。给予各组药物后，RT-qPCR验证得出人参miRNA组大鼠体内的免疫基因表达量有明显变化，人参miRNA能够影响INF-8、IL10、MMP9、IL4R、MARK14、TNF-α、BCL2L1mRNA的表达，其可能影响多条免疫应答信号转导通路，进而调节多种细胞因子的表达来防治气虚证。结论：初次证实人参煎液中miRNA的存在，以及人参m

8、iRNA对气虚疲劳大鼠机体免疫基因的调节作用，为我们提供了认识和研究人参的II广东药科大学硕士研究生毕业论文新途径。从基因的层面深入揭示中医药疗效的作用机制，同时也影响人参类新药