细胞内砷浓度与耐亚砷酸的k562as2耐药机制的关系的实验研究

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1、分类号：R557密级：一般UDC：616编号：2010212328广州医科大学硕士学位论文细胞内砷浓度与耐亚砷酸的K562/AS2耐药机制的关系的实验研究研究生：周昭贵导师：卓家才教授申请学位级别：临床医学硕士年级：二零一零级学科专业：内科学研究方向：血液肿瘤论文提交日期：二零一三年五月论文答辩日期：二零一三年五月学位类型：医学临床学位学位授予单位：广州医科大学答辩委员会主席：评议人:二零一三年五月万方数据广州医科大学硕士研究生学位论文细胞内砷浓度与耐亚砷酸的K562/AS2耐药机制的关系的实验研究Ex

2、perimentalstudyonrelationshipbetweenintracell-ulararsenicconcentrationandmechanismsofresis-tanceofK562/AS2cellstoarsenictrioxide专业名称：血液内科学学位申请人：周昭贵导师：卓家才教授广州医科大学·广州二零一三年五月万方数据目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………………3主要符号表…………………………

3、………………………………………5前言…………………………………………………………………………6材料与方法………………………………………………………………11结果………………………………………………………………………18讨论………………………………………………………………………25结论………………………………………………………………………29参考文献…………………………………………………………………30综述…………………………………………………………………33致谢………………………………………………………

4、……………44原创性声明………………………………………………………………45万方数据中文摘要细胞内砷浓度与耐亚砷酸的K562/AS2耐药机制的关系的实验研究硕士研究生：周昭贵导师：卓家才教授摘要[目的]通过检测亚砷酸敏感细胞株和耐药细胞株的细胞内砷浓度，明确细胞内砷浓度与耐药性的关系；耐药细胞株在不同砷浓度并培养不同时间，观察细胞内砷浓度的变化，并通过检测细胞生长抑制率了解细胞生长受抑的情况，尝试找到一个最适的有效浓度逆转耐药，为临床用药提供参考。另外检测K562/AS2细胞株膜表面不同浓度、不同培养时

5、间的MRP1蛋白表达水平，进一步明确其在耐药机制方面的作用。[方法]本实验设计包括：分别在含三氧化二砷药物浓度为1μg/ml下对K562/S及K562/AS2培养时间为24h、48h、72h细胞内砷浓度的测量；分别对K562/AS2予不同三氧化二砷浓度1、2、4、6μg/ml培养液培养不同时间24h、48h、72h，分别测量不同浓度、不同培养时间的细胞内砷浓度（原子荧光光度法）及抑制率（MTT法）；分别测量培养时间为24h，不同浓度1、2、4、6μg/ml下及同一浓度2μg/ml培养时间为24h、48h

6、、72h下的MRP1蛋白的表达水平（流式细胞仪）。[结果]在培养浓度为1μg/ml且培养时间为24h、48h、72h下，K562/S细胞内的砷浓度均比K562/AS2细胞显著增高，且有统计学意义(P<0.05)。随着浓度的增加及培养时间的延长，细胞内砷浓度逐渐增加(P<0.05)，在1μg/ml-2μg/ml之间增加较快，2μg/ml-6μg/ml之间增加较缓慢。K562/AS2细胞生长抑制率也逐渐增加(P<0.05)，在1μg/ml-2μg/ml之间增加较快，2μg/ml-6μg/ml之间增加较缓慢。

7、在不同药物浓度1、2、1万方数据广州医科大学硕士学位论文4、6μg/ml且培养时间为24h，MRP1蛋白表达水平逐渐增高（P<0.05），在1μg/ml-2μg/ml之间表达水平比较恒定，在2μg/ml-6μg/ml之间却表达明显增高。同一浓度2μg/ml不同培养时间24h、48h、72h，MRP1蛋白表达水平也逐渐增高（P<0.05）。[结论]细胞内砷浓度与K562/AS2的耐药密切相关，在1-6μg/ml浓度之间和培养时间为24h、48h、72h，随着药物浓度的加大及培养时间的延长，细胞内的砷浓度能

8、够增高，也能明显抑制细胞生长，逆转K562/AS2耐药。但在2μg/ml-6μg/ml之间，细胞内砷浓度增加呈现缓慢，同时MRP1蛋白的表达水平也增高，说明在增加药物浓度的同时，细胞也加强外排功能，这为临床上对三氧化二砷常规剂量耐药的患者重新选择药物剂量提供依据。[关键词]：K562/AS2细胞；三氧化二砷(ATO)；细胞内砷浓度；MTT；MRP1蛋白2万方数据英文摘要Experimentalstudyonrelationshipbetwe