山羊痘病毒p32基因跨膜区缺失载体的构建与表达

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1、农业生物技术学报JournalofAgriculturalBiotechnology2008,16(3):385~389·研究论文·山羊痘病毒基因跨膜区缺失载体的构建与表达*熊毅, 朱伟，刘棋**, 郑敏, 李华明,郭建刚(广西壮族自治区动物疫病预防控制中心,南宁530001）摘要：基因是山羊痘病毒（）的主要免疫原性基因，含有跨膜区，用全基因表达表达量较低。实验尝试用重组PCR消除跨膜区，连接入pGEX6p1载体，构建重组表达载体，用IPTG诱导表达，SDSPAGE鉴定结果发现，在58kD处检测到蛋白，与预期目的蛋白位置相符。表达产物以融合蛋白

2、包涵体的形式出现在沉淀中，用山羊痘标准阳性血清对其进行Westernblot检测，表达产物可被山羊痘标准阳性血清识别。用Bandscan软件对所表达的蛋白分析发现，表达产物约占菌体蛋白的29.4%。关键词：山羊痘病毒;基因;重组PCR;表达中图分类号:S188文献标识码:A 文章编号:10061304(2008)03038505ConstructionandExpressionofVectorEncodingGenewithTransmembraneDomainDeletionXIONGYi,ZHUWei,LIUQi**,ZHENGMin,LI

3、Huaming，GUOJiangang）geneisoneofthemajorimmunogenicitygeneof,buttheexpressionlevelofcompleteP32proteinisrelativelylowbecauseofitstransmembranedomain.Inthisstudy,thegene'stransmembranedomainwasdeletedbyrecombinant PCR,thentherecombinantDNAwasinsertedintopGEX6p1vectorandtransfo

4、rmedintoBL21(DE3).TherecombinantproteinwasexpressedeffectivelyinBL21(DE3)inducedbyisopropylthio茁Dgalactoside(IPTG)indifferenttime,concentrationandtemperature, respectively.SDSPAGEandWesternblotingresultsindicatedthatengineeringbacteriacouldexpressa58kDproductwhichwasidentifi

5、edbystandardserumofgoatpox.Bandscansoftwareshowedthatthe expressedfusionproteinwasabout 29.4% oftotal bacterialproteinofBL21(DE3). ;P32protein;recombinantPCR;expression山羊痘(goatpox)俗称羊天花或羊出花，是由痘Davies,1976；Distt,2000)。在国外曾开展了GSTP32病毒科的山羊痘病毒引起的山羊的一种急性、热性重组融合蛋白及HisP32重组融合蛋白的原核表

6、达和接触性传染性疾病(殷震和刘景华,1997)。山羊痘(Carn,1993;Heine,1999)，国内也有研究者对山羊病毒基因组为线性、双股DNA,全长约150kb，至少痘病毒基因转化至杆状病毒进行了表达(郭巍, 有147个开放阅读框(ORF)。基因位于山羊痘2004)。但由于基因含有跨膜区，表达量很低(康病毒基因组64~65kb处，由第74号ORF编码，蛋文玉等，2006;郭巍，2004;郭建刚等,2005)，不能满白分子量为32kD，含有抗原表位，具有跨膜结构足进一步实验的需要。本实验利用重组PCR消除跨（287~307位氨基酸）。在病毒

7、感染早期即可诱导动膜区，构建了一个不含跨膜区的重组载体，在大肠杆物机体产生中和抗体，强烈诱导细胞免疫，与细胞病菌中实现了高效表达。变的产生有关，具有山羊痘病毒的种属特异性，能区1材料和方法分山羊痘和其它痘病毒属的成员，在诊断及亚单位疫苗方面得到广泛应用(殷震和刘景华,1997；1.1病毒、血清与抗体*基金项目：广西科技攻关项目（No.063200214）资助。**通讯作者。AuthorforCorrespondence.研究员，博士，主要从事动物病毒学研究。Tel：07713122592；Email：.收稿日

8、期：20070912接受日期：20071016386农业生物技术学报2008年山羊痘病毒（）分离自广西各县市EB染色后，凝胶紫外成像系统观察并记录电泳