中药复方DS抗诺卡氏菌研究.pdf

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________中药复方DS抗诺卡氏菌研究姓名：邓剑壕学号：2111548026院系：中药学院学位类型：学术学位专业：中药学研究方向：中药新剂型及新技术的研究导师：朱盛山教授论文提交日期：2018年5月26日论文答辩日期：2018年5月25日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文ResearchOnAnti-NocardiaOfTraditionalChineseherbalcompoundDSCand

2、idate：DengJian-haoStudentID：2111548026Affiliation：SchoolofTraditionalChineseMedicineAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：ChineseMedicineSupervisor：Prof.newdosageformsandnewtechnologiesoftraditionalChineseMedicineAssistantSupervisor：Prof.ZhuSheng-shanDayofDefence：May2018

3、Degree-Conferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversityMay2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：本人所呈交的学位论文，系我个人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。除文中已特别加以标注和致谢的地方外，不包含其它个人或机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究做出贡献的其它个人和集体，均已在文中明确说明和致谢。本人充分意识到本声明的法律结果完全由本人承担。学位论文作者签名：日期：2018年5月10日学位论文使用授权的声

4、明本人完全了解广东药科大学有关保留和使用学位论文的规定，学校有权保留和向有关部门或机构送交本论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印或其它复印手段保存和汇编本学位论文。保密论文在解密后适用本声明。论文作者签名：论文导师签名：日期：2018年5月10日广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文中药复方DS抗诺卡氏菌研究摘要目的：筛选抗诺卡氏菌有效复方（中药复方DS），制备中药复方DS最佳提取物，为中药复方提取物抗诺卡氏菌研制提供参考。方法：①测定诺卡氏菌数目与吸光度关系，建

5、立菌悬液中诺卡氏菌计数方法。利用微量肉汤稀释法，以恩诺沙星对诺卡氏菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度为指标，建立体外抑菌效果评价方法，筛选出抗诺卡氏菌效果最佳的中药复方DS。②采用紫外-可见分光光度法建立中药复方DS提取物化学评价方法，考察中药复方DS提取方法、溶媒、粉碎度、溶媒用量、提取时间以及提取次数；使用L49（3）正交设计试验，选取粉碎度、溶媒用量、提取时间和提取次数因素，优选出中药复方DS最佳提取工艺。③以石油醚—乙酸乙酯（8:2）为展开剂，应用薄层色谱法对中药复方DS最佳提取物进行定性鉴别。选用流动相：甲醇—水（80:20），色谱柱：EclipseXDB

6、—C18柱（4.6mm×150mm，5m），柱温：25℃，检测波长：270nm，检测器：DAD，分析时间：30min，流速：1.0ml/min，I广东药科大学硕士研究生学位论文使用高效液相色谱法测定中药复方DS最佳提取物中指标成分C含量。④进行中药复方DS提取物安全性实验。比较了腹腔注射、创伤浸泡、非创伤浸泡、喂食等不同的感染方法，以感染率、死亡率、病原菌的检查等为评价指标，建立诺卡氏菌乌鳢感染模型。以建立的诺卡氏菌感染乌鳢模型为基础，以症状表现、病原检查、死亡率、存活质量为指标，综合评价不同给药量对该动物的治疗效果。⑤分别设试验组与对照组，对比三种代表性免疫

7、指标：溶菌酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶在12d内的变化规律。结果：筛选出中药复方DS抗诺卡氏菌的效果最佳。中药复方DS提取物的紫外最大吸收波长为270nm，线性、重现性、稳定性、加样回收率等方法学考察均小于2%。中药复方DS最佳提取物的制备工艺为：粉碎过60目筛网，选用溶媒Ⅴ，回流提取3次，每次45min，提取溶媒用量为8倍。中药复方DS提取物薄层鉴定样品、对照品的指示斑点一致，展开清晰，Rf值适中。以2×108cfu/ml的诺卡氏菌液，通过腹腔注射感染建立的乌鳢感染模型症状明显，死亡率为10%，感染率为100%，重复性好。中药复方DS最佳提取物治疗乌鳢诺卡氏菌病

8、方案为连续2d取20%投