基于mir-128-3p_nrf2_抗氧化通路介导的黄芪多糖治疗高脂血症大鼠的作用机制研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级：__________UDC：___________基于miR-128-3p/NRF2/抗氧化通路介导的黄芪多糖治疗高脂血症大鼠的作用机制研究姓名：袁前发学号：2111543011院系：基础学院学位类型：学术学位专业：基础医学（病原生物学）研究方向：中药对代谢性疾病治疗分子机制研究导师：杨泽民（高级实验师）论文提交日期：2018年3月30日论文答辩日期：2018年5月16日学位授予单位：广东药科大学二〇一八年五月广东药科大学硕士研究生学位论文StudyontheMechanismofAstragalusPolysacchari

2、deinTreatingHyperlipidemiaRatsbasedonmiR-128-3p/NRF2/AntioxidantPathwayCandidate：YuanqianfaStudentID：2111543011Affiliation：SchoolofbasicAcademicDegreeApliedfor：MasterofMedicineSpeciality：PreclinicalMedicine(pathogenybiology)Supervisor：YangzeminAssistantSupervisor：DayofDefence：March30，2018Degree-Co

3、nferring-Institution：GuangdongPharmaceuticalUniversity52018广东药科大学硕士研究生学位论文基于MIR-128-3P/NRF2/抗氧化通路介导的黄芪多糖治疗高脂血症大鼠的作用机制研究摘要目的：观察黄芪多糖（AstragalusPolysacharin，APS）对高脂血症大鼠的治疗效果，从miR-128-3p/NRF2/抗氧化通路介导的脂质代谢途径探讨黄芪多糖治疗高脂血症的分子机制。方法：1.动物实验将SD大鼠随机分为正常组、疾病模型组、辛伐他汀组和APS组。正常组大鼠喂食基础饲料，其它3组大鼠喂食高脂饲料8周。建模成功后，APS组和辛

4、伐他汀组分别以700mg/kg和6.7mg/kg的浓度灌胃8周，正常组和疾病模型组灌胃等量的生理盐水。实验期间，记录实验大鼠饮水量、饮食量、摄能量、排泄量和体重等日常指标，每4周采集一次血清标本，检测血糖、甘油三脂（TG）、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和丙二醇（MDA）含量以及谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、淀粉酶(AMS)和总超氧化物歧化酶（T-SOD)活性。实验结束后，处死大鼠，摘取大鼠的胰腺和肝脏组织。对实验大鼠的胰腺组织进行切片，利用HE染色观察胰岛和腺泡形态；利用免疫组化染色观察胰岛β细胞数量和功能。对实验大鼠肝

5、组织进行切片，利用HE染色观察肝组织细胞形态和脂肪沉积，并进行肝组织脂肪变性分级；同时，测定实验大鼠肝组织中TC和TG含量，计算肝脾重指数。此外，利用RT-qPCR技术检测肝组织中miR-128-3p的表达，利用WesternBlot方法检测肝组织中miR-128-3p靶基因NRF2的表达。I广东药科大学硕士研究生学位论文2.肝细胞实验采用油酸（OA）和棕榈酸（PA）以2：1浓度构建高脂血症大鼠肝细胞（BRL）和人肝癌细胞（HepG2）模型。利用CCK-8法确定APS对两种细胞作用的最适药物浓度和时间。利用最适的药物浓度和时间处理两种细胞模型，分别测定APS处理组和对照组细胞内TC、TG、

6、MDA和T-SOD水，以及miR-128-3p和NRF2的表达。结果：1.动物实验（1）APS对高脂血症大鼠日常和血脂指标的动态观察高脂饮食8周后，模型组大鼠的能量摄入、体重、血脂水平显著高于正常组（p<0.05），而饮食量、饮水量和排泄量则较正常组低（p<0.05）；药物干预4周后，辛伐他汀组大鼠TC、TG和LDL-C含量较疾病模型组大鼠显著下降（p<0.05），APS组血脂水平无明显变化；药物干预8周后，APS和辛伐他汀组大鼠饮水量、排泄量、体重和血脂水平较疾病模型组大鼠明显改善（p<0.05）。（2）APS对高脂血症大鼠胰腺组织病理改变的影响APS能显著降低高脂血症大鼠的血糖和AMS

7、水平，然而辛伐他汀组没有明显改善。HE染色显示，相对正常组，疾病模型组和辛伐他汀组大鼠胰岛形态改变，边界不规则，胰岛内的血管管腔扩张，且胰岛内的细胞有炎细胞的浸润；APS组大鼠胰岛和腺泡细胞在细胞排列和弥漫性水肿等方面呈不同程度的改善。免疫组化显示，相对正常组，疾病模型组和辛伐他汀组大鼠胰岛细胞排列不规则，多有破损，有较大间隙；APS组胰岛β细胞胞质内胰岛素颗粒着色深，分布较集中，呈现不同程度改善。（3）APS对高脂血症