中南大学学报(医学版)

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1、中南大学学报（医学版）!"##$，%#（%）!"#$%&’(%)*$+（,-#.&/+）"$%!逆转录病毒载体介导的&’()技术稳定抑制前列腺癌细胞株!*+,-./)/的表达"胡!政，蔡!芳，程莉娟，夏!昆，夏家辉，张灼华（中南大学中国医学遗传学国家重点实验室，长沙01##23）［摘要］!目的：建立稳定抑制!*+,-./)/基因表达的前列腺癌细胞株，为探讨4/-5!*+,-./)/信号在前列腺癌发生中的作用提供合适的细胞模型。方法：在!*+,-./)/基因编码区选择%个&’()作用的靶位点，体外合成前体6’(链，复性后连入逆转录病

2、毒载体789:;&*<.-<=，转染包装细胞:(%12，收集含病毒颗粒的培养上清感染6910$细胞，经嘌呤霉素筛选并扩大培养后得到克隆，继续培养"个月形成稳定克隆。免疫印迹检测癌细胞内!*+,-./)/及受其调控的靶基因/012/和/2/3+$45的表达；四甲基偶氮唑盐（>??）比色法检测!*+,-./)/基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果：免疫印迹和&?*:@&结果显示，筛选得到的"个克隆中细胞内!*+,-./)/表达水平下降；且克隆内/012/，/2/3+$45基因的表达下调；>??检测显示，!*+,-./)/表达抑制

3、的细胞克隆吸光度值下降，这表明克隆内细胞数量减少，细胞增殖受到了抑制。结论：成功建立稳定抑制!*+,-./)/基因表达的前列腺癌细胞株。［关键词］!4/-5!*+,-./)/；!&’()；!前列腺癌；!逆转录病毒载体；!稳定抑制［中图分类号］!&2%#A$；B23!!!!［文献标识码］!(!!!!［文章编号］!1C2"*2%02（"##$）#%*#"$%*#$!"#$%&’())*&’’+,-,.!/0#"&-+-&1)*&’’+,-+-)*,’"#"&0#-0&*0&%%%+-&$2*&"*,3+*(’4&5+#"&5678+"

4、D9EF./G，@(HI,/G，@D;’JK)*LM,/，NH(OM/，NH(P),*FM)，ED(’JEFM=*FM,（67%+’$73879’:7%:2’;-#.+/73<#$#%+/=，"#$%:73&’(%)*$+,#:=+%2，")7$>=)701##23，")+$7）8$’"*#0"：9:$;&0"+3&9?=Q.-M7,7<=Q-,-.+,/+.<+.RRR)/.)/SF)+F!*+,-./)/.T7<.QQ)=/)QQ-,URVQM77<.QQ.W,/W-=)/X.Q-)G,-.-F.<=R.=Y4/-5!*+,-

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