中国胭脂鱼的细胞遗传学分析_祝东梅

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1、中国水产科学2013年5月,20(3):682688JournalofFisherySciencesofChina研究简报DOI:10.3724/SP.J.1118.2013.00682中国胭脂鱼的细胞遗传学分析祝东梅,杨坤,王卫民,宋文华中农业大学水产学院,农业动物遗传育种教育部重点实验室,湖北武汉430070摘要:采用植物血凝素、秋水仙素活体注射和肾细胞直接制片法分析了中国胭脂鱼(Myxiocyprinusasiaticus)的染色体核型和Ag-NORs显带;并以中国胭脂鱼血细胞为样本,鸡血细胞DNA含

2、量为标准(2.50pg),用流式细胞仪测定了中国胭脂鱼的DNA含量。结果表明:(1)中国胭脂鱼染色体数目2n=100,核型公式为10m+4sm+12st+74t,NF=114,未观察到次缢痕及随体,亦未发现有性染色体。(2)中国胭脂鱼染色体具有1对Ag-NORs,位于第1对染色体短臂上,间期核中Ag-NORs的数目为1~2个,未见Ag-NORs的联合现象。(3)PI和DAPI作为荧光染料,得出中国胭脂鱼DNA含量分别为5.50±0.24pg和6.16±0.03pg。(4)中国胭脂鱼为四倍体,在特定的分类阶元中

3、属于较原始的鱼类。关键词:中国胭脂鱼;染色体;核型;Ag-NORs;DNA含量中图分类号:S917文献标志码:A文章编号:10058737(2013)03068207中国胭脂鱼(Myxiocyprinusasiaticus),属鲤为中国胭脂鱼种质资源保护、基因染色体定位、形目(Cypriniformes),胭脂鱼科或称亚口鱼科遗传育种等提供基础资料和科学依据。(Catostomidae)。作为中国也是亚洲的特有种,中1材料与方法国胭脂鱼仅分布于长江干、支流和附属的湖泊和闽江流域,在系统分类和生物地理学

4、上具有很高1.1材料的研究价值。近年来,由于环境污染、过度捕捞实验用中国胭脂鱼购自湖北省武汉市野芷湖和水利工程建设等因素,中国胭脂鱼的自然资源渔场,6尾雌鱼,4尾雄鱼,体长13.3~17.8cm,体明显减少,中国已将其列为二级水生野生保护动质量45.2~100.7g,在室内水族箱内暂养至少1周物[1]。中国胭脂鱼幼鱼体形奇特,花纹鲜艳,是非后开始实验。1.2中国胭脂鱼染色体分析常重要的观赏鱼珍品之一。还因其具有个体大、[9]1.2.1中国胭脂鱼染色体标本制备参照林义浩生长迅速、肉质鲜美、抗病力强等特点,中国胭

5、脂鱼人工繁殖的苗种市场前景广阔,已成为部分提出的植物血凝素(PHA)体内注射法对中国胭脂区域淡水养殖新的优良品种[2]。目前,对中国胭脂鱼进行前处理,按10μg/g鱼体质量胸鳍注射PHA,[3][4−5]20~24h后按2~4μg/g鱼体质量注射秋水仙素,3~4鱼的研究多集中在繁殖、生长发育及遗传多[6]样性等方面,而细胞遗传学方面的研究较少,h后解剖取出肾组织。细胞悬液的制备、低渗、固[7−8]且很不全面。本研究对中国胭脂鱼的染色体数定、滴片和染色主要参照文献[10]的方法进行。目、核型、Ag-NORs显带

6、和DNA含量进行研究,1.2.2核型分析将染色好的染色体玻片在显微以期在细胞水平上探讨中国胭脂鱼的进化地位,镜(Motic,BA400)下观察和拍照。统计100个分散收稿日期:20120909;修订日期:20121129.基金项目:现代农业产业技术体系建设专项(CARS-46-05);中央高校基本科研业务费专项资金项目(2011PY023,2011PY043).作者简介:祝东梅(1982−),女,博士研究生,从事鱼类遗传与育种研究.E-mail:zhudongmei1215@163.com通信作者:王

7、卫民,教授.E-mail:wangwm@mail.hzau.edu.cn第3期祝东梅等:中国胭脂鱼的细胞遗传学分析683良好、形态清晰的染色体分裂相的染色体数目,式中:X表示中国胭脂鱼血细胞荧光强度;H表示同时选取10个数目完整、长度适中、无重叠的中鸡血细胞荧光强度。[11]期分裂相,按Levan等的标准进行分类、配对2结果与分析和核型分析。1.2.3Ag-NORs显带参照文献[12]的方法略作2.1中国胭脂鱼的染色体数目修改,将制备好的染色体玻片标本放在培养皿中,100个中期分裂相的染色体数目如表1所示。置

8、于60~70℃水浴中保温,再在玻片上滴加适量由表1可见,中国胭脂鱼肾细胞染色体的数目在反应液(50%AgNO3与含1%甲酸的2%明胶以2:194~104,染色体数为100的细胞个数占总计数的混合),然后盖上盖玻片,待反应液由无色透明变68%。因此,可以认定100为众数染色体数,确定黄,再变成棕褐色后,用蒸馏水快速冲洗,去除中国胭脂鱼的染色体数目为2n=100。此外,未观盖玻片,干燥后显微观察和拍照。