炎症反应中p2x7受体与nalp3的相关性及机制研究

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1、分类号R392密级公开UDC硕士学位论文炎症反应中P2X7受体与NALP3的相关性及机制研究学位申请人：神谢静学科专业：免疫学指导教师：韩莉教授二○一三年三月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineCorrelationandmechanismresearchofP2X7receptorandNALP3intheinflammatoryGraduateStudent:S

2、henXiejingMajor:ImmunologySupervisor:Prof.HanLiChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMarch,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明

3、的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签

4、名：日期：Ⅰ三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：检测脂多糖（LPS）与三磷酸腺苷（ATP）处理单核细胞THP-1模拟炎症反应后P2X7受体与NALP3表达情况，了解P2X7受体及NALP3的相互关系；同时用钾离子拮抗剂格列本脲、Pannexin-1拮抗剂CBX及青蒿琥酯处理对照组与实验组，进一步探讨P2X7受体影响NALP3表达的可能机制。方法：(1)FCM检测炎症反应中细胞THP1表达P2X7受体及NALP3的情况。(2)MTT法检测LPS、ATP处理细胞后细胞生长及凋亡情况，选择最适作用浓度。(3)qP

5、CR、FCM、Westernblotting分别检测LPS、ATP处理细胞模拟炎症反应后，P2X7、NALP3表达的变化，同时通过格列本脲、CBX及青蒿琥酯分析P2X7影响NALP3及IL-1的可能机制。结果：（1）LPS与ATP共同作用细胞后，P2X7与NALP3的表达明显高于单个药物的处理（2）钾离子拮抗剂格列本脲处理已用LPS孵育过的细胞，发现P2X7受体与NALP3表达变化不大；但作用ATP孵育或LPS与ATP共同孵育过的细胞，P2X7受体与NALP3表达明显降低（3）Pannexin-1拮抗剂C

6、BX处理LPS单独处理的细胞，P2X7受体与NALP3表达变化不大；但作用ATP孵育或LPS与ATP共同孵育过的细胞，P2X7受体与NALP3表达明显降低（4）青蒿琥酯处理ATP单独处理细胞，P2X7受体与NALP3表达变化不大；但作用LPS孵育或LPS与ATP共同孵育过的细胞，P2X7受体与NALP3表达明显降低（5）格列本脲、CBX与青蒿琥酯共同处理LPS与ATP共同孵育过的细胞，P2X7受体与NALP3表达降低结论：炎症反应中P2X7受体与NALP3均有表达，并且在ATP的持续刺激下，P2X7受体与

7、NALP3均明显升高，但当用钾离子拮抗剂格列本脲或Pannexin-1拮抗剂CBX处理，其表达明显降低，说明P2X7受体可能是通过钾离子通道或Pannexin-1非特异孔道调节NALP3炎症小体；用青蒿琥酯、格列本脲及CBX共同作用，P2X7受体与NALP3的表达与分别单独用药处理没有明显区别，说明青蒿琥酯通过P2X7受体-NALP3途径发挥抗炎作用的可能性不大。本研究结果提示P2X7受体在炎症反应中起着重要的作用，可作为炎症治疗和预防的潜在靶点。关键词：P2X7受体NALP3格列本脲CBX青蒿琥酯Ⅱ三峡

8、大学硕士学位论文AbstractObjectiveTostudytherelationshipbetweenP2X7receptorandNALP3throughdeterminingtheirexpressioninTHP-1monocytecellstreatedbylipopolysaccharide(LPS)andexogenoustriphosphateadenosine(ATP).Tofurtherexploret