过表达海藻糖-6-磷酸合成酶拮抗酵母菌工程菌株的构建

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1、中国摩学c萋握2011,27(9)：352—357ChineseAgriculturalScienceBulletin过表达海藻糖一6一磷酸合成酶拮抗酵母菌工程菌株的构建宋海超’，张勇，符文英，林明辉，史学群(海南大学环境与植物保护学院，海口570228：海南出入境检验检疫局，海口570311；海南大学农学院，海口570228：三亚市南繁科学技术研究院，海南三亚572000)摘要：本研究构建了带G418抗性的载体pFL61．G418，从酿酒酵母WT303菌株中克隆了真菌抗逆境基因tpsl(海藻糖一

2、6一磷酸合成酶基因)，再将tpsl基因插入到pFL61一G418载体的Nofl位点，构建pFL61．G418一tpsl表达载体，并将该表达载体转化进入野生型拮抗酵母膜醭毕赤酵母菌株中。构建过表达海藻糖一6，磷酸合成酶拮抗酵母茵工程菌株，增强拮抗酵母茵的抵抗逆境的生存能力，从而提高其生活力及与病原菌的竞争力。结果表明成功地构建了过表达海藻糖一6一磷酸合成酶拮抗酵母茵工程菌株，说明pFL61穿梭质粒可以用来转化野生型拮抗酵母，G4l8抗性可以作为转化子筛选的阳性标记。该重组表达载体的成功构建，为野生型

3、拮抗酵母的遗传改良提供了重要的理论依据。关键词：海藻糖；拮抗酵母；抗逆性；载体构建；过表达中图分类号：Q93文献标志码：A论文编号：2011—0111ConstructionofVectorforHighTrehalasebyOverexpressionoftpslinAntagonisticYeastP~chiamembranefaciensSongHaichao，ZhangYong。，FuWenying。，LinMinghui，ShiXuequn(CollegeofEnvironmentand

4、PlantProtection,HainanUniversity,Haikou570228；~HainanEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau，Haikou570311；CollegeofAgriculture，HainanUniversity，Haikou570228；4SanyaSci-TechAcademyforCropWinterMultiplication，SanyaHainan572000)Abstract：TheG418resistancee

5、xpressionvectorpFL61-G418wasconstructedandtrehalose-6-PsynthasegenetpslfromthestrainWT-303ofSaccharomycescerevisiaewascloned．pFL61-CA18-tpslexpressionvectorwasconstructed，anditwastransformedintoPichiamembranefaeiensbylithiumacetatemethod．Overexpressio

6、noftpslgeneimprovedthestresstoleranceofmembranefaeiens,enabledthecellstoincreaseviabilityandbiocontrolability．Wesucceededinconstructionofvectorf0rhightrehalasebyoverexpressionoftpslgeneinantagonisticyeast．TheresultsshowedthatyeastshuttlevectorpFL61cou

7、ldbeusedtotransformwildtypeantagonisticyeastandG418resistancecanbeusedasadominantselectablemarkertoselecttransformants．TheplasmidpFL6l-G418providesavisibleandeffectivemethodforstudyingthefunctionsofexogenousgenesexpressioninwildtypeantagonisticyeast．K

8、eywords：trehalose；antagonisticyeast；stressresistance；vectorconstruction；overexpression0引言湿环境，果实表面干燥及营养亏缺，采后低温、低O：和酵母菌因为不产生抗生素，在安全性上被广泛认高CO：条件的胁迫，都直接影响拮抗酵母菌的生活力可，成为果蔬病害生物防治的主要拮抗菌。尽管拮抗和抑病力。因此在半商业化条件下，其防治效果不菌能防治许多水果的采后病害，但采前田间的高温、低如化学防治。大规模应用中，只有