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1、实验一母种培养基的配制一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；二、主要仪器设备及药品材料：试管(若干个)、刀、砧板、天平、电磁炉，铝锅、棉塞(或硅胶塞)、纱布、烧杯、量筒、马铃薯、琼脂、葡萄糖、高压灭菌锅三、实验步骤与方法：1PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升.2.母种培养基的配制(1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。
2、滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。(2)调节PH值。(3)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。(4)捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。(5)灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。(6)摆斜面，培养基长度约为试管长度的l/2o斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或儿层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。2、胡萝卜马铃薯培养
3、基配方马铃薯20g,胡萝卜20g,琼脂20g,水1000ml3、完全培养基配方蛋白腺2g,葡糖糖20g,磷酸二氢钾0.46g,硫酸镁0.5g,磷酸氢二钾lg,琼脂15g,水1000ml四、实验结果1•常用的母种培养基配方①马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去皮）200g,葡萄糖20g。琼脂20g,水1000ml,{如果需要配制250ml的培养基，那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是50:5:5},也可用蔗糖取代葡萄糖，即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3g,硫酸镁1.5g,维生素B110mg,即为
4、马铃薯综合培养基。广泛适用于各种食用菌母种的分离，培养和保藏。②马铃薯玉米粉培养基：马铃薯（去皮）200g,蔗糖20g,玉米粉50g,琼脂20g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,水1000ml。本配方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。③马铃薯黄豆粉培养基：马铃薯200g,蔗糖20g,琼脂20g,黄豆粉20g,碳酸钙10g,磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g,水10OOmL适用于蘑菇、草菇。④葡萄糖蛋白腺琼脂培养基:葡萄糖20g,蛋白腺20g,琼脂20g,水lOOOmlo①蛋白腺、酵母、葡萄糖琼脂培养基：蛋白腺
5、2g,酵母膏2g,硫酸镁0.5g,磷酸二氢钾0.5g,磷酸氢二钾1g,葡萄糖20g,维生素B120mg,琼脂20g,水lOOOmlo具体步骤1.计算。按照选定的培养基配方，计算各种成分的用量。2.称量。用天平秤取各种物质，马铃薯去皮去芽眼，削掉青绿部分，对不易称量的成分，可用玻棒和烧杯称重，微量元素等需要量少，难以称准时，可先配成较浓的原液，再从中取出需要的量。3.配制。若配制合成培养基，先量取蒸憾水，加入琼脂，加热溶化；再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失，加入的顺序一般是先加缓冲剂，再依次
6、加入主要元素、微量元素和维生素等;若各种成分均不发生沉淀，也可一起加入。4.煮汁，去滤液。马铃薯切成1cm见方的小块或2〜3mm厚的薄片，加水约1200ml煮沸，再用文火保持20〜30分钟、并适当搅拌，使营养物质充分溶解出来，然后用4层预湿的纱布过滤，取其滤液。5.补足水量，加药品溶化。补足水量至1000ml,然后往滤液中加入琼月旨，小火加热，搅拌至琼脂完全溶解，再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后，用PH试纸检测其PH值，可根据需要使用氢氧化钠和盐酸，调整适宜的酸碱度，进行分装。注意开锅搅拌，防止溢出或
7、焦底。6.分装试管。制备好的培养基应趁热分装，可用玻璃试管，首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上，下接一段乳胶管和玻璃管，用弹簧夹夹住胶管。手拿试管，分装量掌握在试管长度的四分之一。注意分装时，培养基不能粘在试管口壁上，否则会污染棉塞。7•赛棉塞。注意要松紧适度&高压锅灭菌30分钟
