艾滋病无症状期热毒蕴结证与脾肾阳虚证差异蛋白组学标志物的验证研究

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1、ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine（临床医学院）二0一八届硕士研究生学位论文艾滋病无症状期热毒蕴结证与脾肾阳虚证差异蛋白组学标志物的验证研究ThestudyontheverificationofdifferentialproteomicmarkersbetweensyndromeofSpleen-KidneyYangDeficiencyandHeat-toxinStagnationinasymptomaticperiodofAIDS研究生姓名：苏姣

2、指导教师：冯全生教授学科专业：中医内科学二0一八年四月学位论文艾滋病无症状期热毒蕴结证与脾肾阳虚证差异蛋白组学标志物的验证研究ThestudyontheverificationofdifferentialproteomicmarkersbetweensyndromeofSpleen-KidneyYangDeficiencyandHeat-toxinStagnationinasymptomaticperiodofAIDS苏姣指导教师姓名：冯全生教授申请学位级别：硕士学位专业名称：中医内科学论文提交时间：2

3、018年4月论文答辩时间：2018年5月二0一八年四月“十二五”国家科技重大专项“基于转化医学的艾滋病、病毒性肝炎和结核病中医证候生物学研究”（研究编号：2012ZX10005001）2背景艾滋病病机复杂，病理产物多样，至今尚未形成公认、统一的证候分型，影响了中医药应用于艾滋病防治的进展，艾滋病无症状期是中西医结合治疗干预的黄金切入点，深入探索无症状期的中医证候规律和特征，对提高艾滋病中医辨证论治的水平和疗效意义重大。本课题组前期运用iTRAQ技术筛选出了艾滋病热毒蕴结证及脾肾阳虚证患者显著性差异表达蛋

4、白，其中热毒蕴结证组筛选出了184个有显著性差异表达蛋白（差异倍数大于1.2），其中上调的有94个，下调的有90个。发现其主要涉及调控防御反应、急性炎症反应以及免疫效应的正态调控、调节白细胞免疫介导、外部刺激的应答等；脾肾阳虚证组筛选出174个显著差异蛋白（差异倍数大于1.2），其中上调的有79个，下调的有95个。其涉及的功能主要有氧化还原酶的活动、调节内皮细胞增殖、过氧化物酶活性、调节细胞内的蛋白激酶级、抗氧化活性、信号传导的调控联、催化活性等。基于课题组前期筛选结果进一步验证与疾病证候具有高度相关性

5、的蛋白，为科学客观的揭示中医证候内涵提供依据。目的运用WesternBlod技术对前期筛选结果中具有显著差异表达蛋白进一步行临床验证，将目的蛋白的表达变化情况与筛选结果进行比对，以期获得艾滋病无症状期热毒蕴结证与脾肾阳虚证的特征性蛋白谱。从蛋白组学角度进一步明确两证型的生物学基础和科学内涵，为艾滋病的中医证候诊断提供科学的客观化依据。方法选取课题组前期筛选出的显著差异表达蛋白，其中热毒蕴结证相关差异表达蛋白3个分别为：apoD、FN1、Gpx1；脾肾阳虚证相关差异表达蛋白：ApoE。采用蛋白质印迹法（W

6、esternBlot）技术分别对采集的无症状期热毒蕴结证组、脾肾阳虚证组及健康对照组血清标本进行相关差异蛋白检测，运用imageJ软件分3析灰度值，将每泳道所得出目的蛋白的灰度值与相应的白蛋白灰度值做比较，得出相对灰度值，将其分别导入到GraphPadPrism5软件。计数资料采用Fisher精确概率法。均数±标准差（±s）来表达正态分布资料。以P＜0.05标准作为差异性标准。采用SPSS21.0统计软件统计相关临床资料。结果1、艾滋病无症状期热毒蕴结证组与健康对照组相较，FN1在无症状期热毒蕴结证表达

7、下调，差异有统计学意义（P<0.05），与iTRAQ筛选结果一致；Gpx1在艾滋病无症状期热毒蕴结证表达下调，差异有统计学意义（P＜0.05），与iTRAQ筛选结果一致。apoD表达在艾滋病无症状期热毒蕴结证上调，差异有统计学意义（P<0.05），与iTRAQ筛选结果不一致。2、艾滋病无症状期脾肾阳虚证组与健康对照组比较，ApoE在无症状期脾肾阳虚证表达下调，差异有统计学意义（P<0.05），与iTRAQ筛选结果相一致。结论1、本研究验证了FN1、Gpx1与艾滋病无症状期热毒蕴结证具有一定的相关性，可能

8、为无症状期热毒蕴结证的潜在生物标志物。功能主要涉及应激反应、体液免疫应答、补体激活和先天免疫等。2、本研究验证了ApoE与艾滋病无症状期脾肾阳虚证具有一定的相关性，提示ApoE可能作为艾滋病无症状期脾肾阳虚证的特征性蛋白，功能主要涉及人体免疫、炎症等。3、本研究获得艾滋病无症状期热毒蕴结证及无症状期脾肾阳虚证的显著差异表达蛋白，从蛋白组学角度探明艾滋病中医证候的客观生物学基础。关键词艾滋病；无症状期；热毒蕴结证；脾肾阳虚证；WesternB