pink1parkin介导的线粒体自噬功能障碍在sca3mjd发病中的作用机制研究

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1、分类号R741.02学校代码10601密级公开编号Y1002064硕士学位论文PINK1/parkin介导的线粒体自噬功能障碍在SCA3/MJD发病中的作用机制研究学科专业:内科学研究方向:神经内科研究生姓名:柏杖勇学号:Y1002064学位类型：科学学位导师姓名:李清华教授二O一三年四月I独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其

2、他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日-学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优

3、秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日II目录PINK1/parkin介导的线粒体自噬能障碍在SCA3/MJD发病中的作用机制究…………………………………………………………………1中文摘要………………………………………………………………1ABSTRACT……………………………………………………………4英汉缩略词对照表……………………………………………………………8前言……

4、………………………………………………………………9第一节ataxin-3能够影响PINK1在细胞内的定位…………………………131材料与方法………………………………………………………132结果…………………………………………………………………213讨论…………………………………………………………………24第二节3-MA、MG-132、CCCP对Ataxin-3、线粒体蛋白的影响……………………………………………………………………………271材料与方法………………………………………………………272结果…………………………

5、………………………………………313讨论…………………………………………………………………36第三节ataxin-3蛋白能够干预PINK1蛋白、线粒体蛋白的分布和降解……………………………………………………………………………381材料与方法………………………………………………………382结果…………………………………………………………………493讨论…………………………………………………………………524结论…………………………………………………………………57参考文献………………………………………………………………58

6、III综述……………………………………………………………………………61攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………82致谢……………………………………………………………………………83IVPINK1/parkin介导的线粒体自噬功能障碍在SCA3/MJD发病中的作用机制研究中文摘要目的：研究ataxin-3是否参与了对PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的调控；明确野生型和突变型ataxin-3对PINK1/Parkin介导的线粒体自噬的影响；阐述PINK1/Parkin介导的线粒体自噬功能障碍在

7、SCA3/MJD发病机制中的作用。方法:以体外人工培养细胞为模型，通过目标质粒转染、相关药物等干预、应用免疫荧光-激光共聚焦技术明确ataxin-3是否参与PINK1/parkin介导的线粒体自噬途径的降解。应用werstemblot技术研究野生型、polyQ扩展突变型ataxin-3对PINK1蛋白以及线粒体蛋白降解的影响。抑制自噬-溶酶体途径、蛋白酶体途径后，野生型以及polyQ扩展突变型ataxin-3对PINK1蛋白降解的影响。结果：免疫荧光-激光共聚焦结果显示：PINK1蛋白定位于细胞质，模拟线粒体损伤的条件下

8、，PINK1的蛋白聚集体在细胞内分布有所改变，但PINK1完全不能转移到细胞核内，线粒体部分聚集，不同程度地与PINK1共定位。在野生型ataxin-3干预组，PINK1蛋白聚集体定位于细胞核；而PolyQ扩展突变型ataxin-3组中，PINK1聚集体定位于细胞核。J功能区突变的野生型ataxin-3干预组中，在模