肌酸磷酸激酶同功酶(ck-mb)dgkc速率法

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1、项目肌酸磷酸激酶同功酶（CK-MB）方法DGKC速率法目录1.检测原理2.标本采集与处理2.1受检者的准备2.2静脉采血2.3抗凝剂2.4标本处理3.试剂3.1试剂3.2校准血清3.3试剂、校准血清的稳定性4.仪器5.操作6.计算7.操作性能7.1精密度7.2准确度7.3灵敏度7.4可报告范围7.5特异性7.6干扰8.参考值9.临床意义附录A:参数1.检测原理试剂中加入抑制CK-M的抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性而不影响CK-B亚基的活性，所得结果乘以2即得CK-MB的活性。CK肌酸磷酸+ADP-----------肌酸+ATPHKATP+葡萄糖

2、---------葡萄糖-6-磷酸+ADPG6PDH葡萄糖-6-磷酸+NADP+------------6-磷酸葡萄糖酸+H++NADPH2．本采集与处理2.1受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。2.2静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3抗凝剂

3、：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4标本处理：血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。3．试剂3.1试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK-MB试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：组成R1:R2=4:1混合后溶液的浓度咪唑缓冲液:100mmol/LPH=6.7醋酸镁10mmoll/LN-乙烯半胱氨酸（NAC）20mmol/LEDTA2mmol/LNADP2mmol/L葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）>1

4、500U/L己糖激酶（HK）>2500U/L抑制CK-MM的人抗体>2000U/L葡萄糖20mmol/L肌酸磷酸30mmol/L二腺苷-5-磷酸10umol/LAMP5mmol/LADP2mmol/L3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的CKMB校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3试剂、校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度高于0.5时，试剂按照失效处理。CKMB校

5、准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。4．仪器KONELAB30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。5．操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6．计算ΔA/min×Vt×1000CK-MB(U/L)=-----------------------------=ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分钟吸光度变化率；e

6、——18.5摩尔吸光系数；Vt——反应液总体积（ml）；d——1比色杯光径（cm）；1000——变化因数；Vs——标本体积（ml）；7．操作性能7.1精密度：批内CV<0.55%，批间CV<4.51%。7.2准确度：检测结果的相对不准确度≤±10%。7.3灵敏度：肌酸磷酸激酶同功酶浓度为：500U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.054～0.066。7.4可报告范围：血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1000U/L。7.5特异性：测量值在给定值的90%-110％范围内。7.6干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000

7、mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8．参考值0～24U/L9．临床意义肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性，结合心肌酶图谱，有助于心肌梗塞的诊断。在急性心肌梗塞胸痛发作后，血清CPK－MB上升，24小时达高峰，至48小时消失，若CPK－MB再度上升，提示有心肌梗塞复发。血清CK-MB测定的最重要意义在于诊断急性心肌梗塞。急性心肌梗塞胸痛发作后4～6小时，病人血清CK-MB先于总活性开始升高，12～36小时达峰值；多在72小时内恢复正常。其最高值达对照组4.9～22倍以上。如果梗塞后3～4天，CK-MB仍

8、持续不降，表明心肌梗塞仍在继续进行，如果已下降的CK-MB再次升高则提示原梗塞部位病变扩展或有