基于金纳米颗粒的目视比色凝血酶检测和特定序列dna分析

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1、基于金纳米颗粒的目视比色凝血酶检测和特定序列DNA分析GoldNanoparticlebasedColorimetricDetectionofThrombinandSequence-specificDNA学科专业：药物化学研究生：牛亚静指导教师：杜云飞副教授天津大学药物科学与技术学院二零一三年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工

2、作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日中文摘要中文摘要目视比色法是根据反应的颜色变化来确定物质含量的一种简单分

3、析方法。此方法具有易于观测、仪器设备简单、操作简便的特点。金纳米颗粒性质稳定、易于制备，亲和力强、生物相容性好，是一种理想的标记分子，已广泛应用于生物分析领域。论文以金纳米颗粒为标记物，采用目视比色法，发展了的凝血酶比色分析和特定序列DNA比色分析方法。整个论文由以下三个部分组成：第一章：综述——金纳米颗粒的研究进展及应用本章综述了金纳米颗粒的性质、制备技术以及金纳米颗粒在生物分析领域中的应用。第二章：基于金纳米颗粒的凝血酶比色分析法本章建立了基于纤维蛋白原修饰的金纳米颗粒的凝血酶比色分析法。该方法借助于人体凝血过程中凝血酶-纤维

4、蛋白原作用机制。将凝血酶和纤维蛋白原修饰的金纳米颗粒同时加入固定有纤维蛋白原的96微孔板，凝血酶裂解纤维蛋白原形成网状彼此连接的纤维蛋白，将金纳米颗粒固定于微孔板表面。结合金染色方法，可以将凝血酶检测信号转换为裸眼可观测的实验信号。在优化的实验条件下，对凝血酶的最低检测限为3.2fM。由于凝血酶与纤维蛋白原之间特异性的识别作用，此检测分析法显示了很好的专一性，还有望应用于复杂成分中凝血酶的含量测定。第三章：基于金纳米颗粒的特定序列DNA比色分析法本章建立了基于金纳米颗粒和发夹DNA构型改变的特定序列DNA目视比色分析法。发夹DNA

5、两端分别标记氨基和生物素，通过氨基固定于96微孔板表面。当未加入目标DNA时，发夹DNA成闭合状态，其空间结构阻止了链霉亲和素-金纳米颗粒的结合；当加入目标DNA，发夹结构被破坏，从而促进了链霉亲和素-金纳米颗粒与生物素的结合。金纳米颗粒催化的金染色法能够将特定DNA检测信号转换为裸眼可观测的实验信号。该方法具有较高的特异性和检测灵敏度，可达到2pM。关键词：金纳米颗粒目视比色法凝血酶特定序列DNAABSTRACTABSTRACTColorimetricassayofthedetectionprincipleisbasedonth

6、ecolorchangeofthesolution.Thismethodmeanssimple,fast,andsensitive,soithasbeenwidelyappliedinmoleculardiagnostics,pharmaceutical,environmentandotherfields.Goldnanoparticlehasuniqueproperties,suchasoptimal,mechanical,thermalandelectricalproperty,whichledtoabetterlabelmo

7、lecular.Becauseofcheapprice,simpleprotocol,stablecharacterofgoldnanoparticles,andhighactivityofthelabeledbiomolecules,ithasbeenappliedinmanyfields.Thisassaydevelopedthrombinandsequence-specificDNAdetectionmethodsbasedonthecolloidalgoldaslabel.Theresearchinmyassayconsi

8、stsofthreeparts:Chapter1:Review-researchprogressofgoldnanoparticlesNanomaterialshavebeenwidelyusedinchemicalandbiologicalsen