一株o型口蹄疫弱毒株的构建与生物学特性测定

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1、独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容，也不包含为获得中国兽医药品监察所或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。学位论文作者签名：雯彰丁矶I≥年6月I≯Et关于论文使用授权的说明本人完全了解中国兽医药品监察所有关保留、使用学位论文的规定，即：中监所有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩

2、印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国兽医药品监察所可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生躲更乙亍导师签名：时间：讪f≥if-厶月·牛日时间：∥，；年石月，钐日中国兽医药品监察所硕士学位论文摘要●—■■■■●—■■■■■口蹄疫(Foot．and．MouthDisease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot．and．MouthDiseaseVirus，FMDV)引起的烈性传染病，主要感染牛、羊、猪等家畜。在当前FMD流行的国家和地区，灭活疫苗在疫情防控中仍发挥着重要作用。FMD灭活疫苗的生产必须在生物安全三级以上的车间

3、进行，疫苗生产车间必须有高度安全的防泄漏系统，以防止病毒泄漏、扩散引起疫病暴发。尽管如此，因生产用强毒的泄露而导致的FMD暴发时有发生，造成了巨大的经济损失。因此，在没有安全、有效的FMD新型疫苗的情况下，在灭活疫苗生产中减少或停止使用强毒，寻求使用中等毒力或者弱毒力种毒替换强毒进行生产，才能从根本上解决潜在的散毒危机。本研究在实验室已构建的缺失毒力蛋白Lp∞、删除结构蛋白VPI、VP2和VP3并插入多克隆位点Sspl和SgrAl的载体上，插入O型FMD疫苗种毒猪源泛亚毒株的结构蛋白VPl、VP2和VP3编码序列，构建感染性克隆，并成功拯救出嵌合弱毒v4一LL，进而研究测定了该病毒的生物学

4、特性。结果发现v4一LL能够在贴壁和悬浮细胞中有效增殖；具有与强毒相同的乳鼠致病力；能导致豚鼠发病，但症状轻微；使用107LD50病毒量接种猪后，猪没有出现典型的FMD症状。结果证明v4．LL具有良好的细胞培养增殖能力，对乳鼠的致病力与强毒相当，对豚鼠的致病力低，对猪无明显致病力。这为使用该嵌合弱毒作为FMD安全制苗种毒的可行性提供了基础试验数据，为使用该弱毒载体系统制备FMD安全种毒做了铺垫，探索了解决当前FMD灭活疫苗生产存在散毒风险的新方法。关键词：口蹄疫，灭活疫苗种毒，嵌合弱毒，生物学特性中国兽医药品监察所硕士学位论文ABSTR．ACTABSTRACTFoot—and—mouthd

5、isease(FMD)，causedbyfoot-and-mouthdiseasevirus(FMDV)，isafulminminginfectionsdiseasemainlyinfectsclovenanimalssuchascattle，sheepandswine．Currently，FMDinactivatedvaccineisofgreatimportanceinFMDpreventionandcontrolcampaignofFMDepidemiccountries．FMDinactivatedvaccinemustbemanufacturedinatleastbiosafet

6、ylevel-3facilitieswithhighsecureleakpreventionsystemagainstescapeofthevirulentFMDV．Despiteallthis，outbreakcausedbyvirusescapefromthemanufacturehappenedsometimes，leadingtogreateconomiclosses。Therefore，withoutsafeandeffectivenovelFMDvaccine，itisnecessarytodecreaseorstopusingvirulentFMDVforvaccinepro

7、duction，possiblybysubstitutevirlentviruswithmiddlevirulentorattenuatedvirusinthevaccineproduction，toresolvethepotentialvirusescapecrisisfundamentally．Inthisresearch，byinsertingthestructureproteingeneVP1，VP2andVP3