不同载体转染多发性骨髓瘤细胞株转染效率的比较

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1、中图分类号R55UDC610硕士学位论文学校代码密级10533不同载体转染多发性骨髓瘤细胞株转染效率的比较一‘，’J一‘⋯一Comparisono士仃anlectionetliciencybetweenadenoviruscomplexesandliposomecomplexesinmultiplemyelomacellline作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：马方宇临床医学内科学湘雅三医院刘竞教授论文答辩日期垫艮笠127答辩委员会主席中南大学2013年5月原创性声明哪帅帆砌帆Ⅲ哪m帅岫Y2421537本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师

2、指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谫}的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：盈望日期：j坐二年』月上，7日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究

3、所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。期：盟年』月丑卫不同载体转染多发性骨髓瘤细胞株转染效率的比较摘要目的：用腺病毒感染，脂质体转染两种方法将PDCD5基因导入人多发性骨髓瘤细胞KM3和U266，人慢性粒细胞白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2四种细胞株，比较其转染效率，并对PDCD5mRNA和蛋白的表达进行检测，以探索一种适合删细胞的外源基因导入法，为后续进；厅PDCD5基因促进多发性骨髓瘤细胞凋亡机制的研究提供载体。方法：利用本实验已构建的真核表达质粒pYr—ads一4一PDCD5，设转染目的基因组、转染空载体

4、组、未转染组三组；构建及包装腺病毒rAd-PDCD5-EGFP，设置感染目的基因组、感染空载体组、未感染组三组，分别采用脂质体LipofectamineTM2000转染，腺病毒感染多发性骨髓瘤细胞KM3及U266细胞，人慢性粒细胞白血病细胞K562，肝癌细胞HepG2，48h后在荧光显微镜下观察转染效率，并予实时荧光定量PCR(Real—timeQuantitativePCR，qPCR)、蛋白免疫印迹术(Westernblot)分别检测PDCD5在四种细胞中mRNA水平和蛋白水平的表达。结果：脂质体介导的PDCD5重组质粒对刚3，U266及K562的转染效率分别

5、约为45％，49％，55％，对HepG2的转染效率约为70％，实时荧光定量PCR及Westernblot测定PDCD5mRNA表达水平和PDCD5蛋白表达水平目的基因组均明显高于转染空载体组和未转染组，转染空载体组和未转染组问无明显差异。腺病毒rAd-PDCD5-EGFP对KM3及U266感染效率分别为33％，29％，对K562细胞感染效率为65％，但对HepG2细胞感染效率较高，约为80％，实时荧光定量PCR及Westernblot测定PDCD5RNA表达水平和PDCD5蛋白表达水平目的基因组均明显高于感染空载体组和未感染组，感染空载体组和未感染组间无明显差异

6、。结论：脂质体对KM3及U266的转染效率高于腺病毒，脂质体转染法对于骨髓瘤细胞而言，是一种有效的外源基因转入方式，可为PDCD5基因促删细胞凋亡机制的研究提供载体。图49幅，表24个，参考文献35篇关键词：多发性骨髓瘤；PDCD5：腺病毒；脂质体；转染效率分类号：R55ComparisonoftranfectionefficiencybetweenadenoviruscomplexesandliposomecomplexesinmultiplemyelomacelllineABSTRACTObjective：Comparetransfectionefficie

7、ncyofadenovirusrAd—PDCD5一EGFPcomplexesandpYr-ads-4-PDCD5complexesinmultiplemyeloma(MM)KM3cells，U266cells，Humanchronicmyelogenous1eukemiaK562cells，HepatocellularcarcinomaHepG2cells．ExploreanoptimumadministrationrouteforintroducingexogenousPDCD5gene，whichwasregardedasaMMapoptosis—relat

8、edgene．into：