不同浓度rgd修饰纯钛表面对牙龈成纤维细胞生物学行为的影响

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1、论文题目：丕圃邃廑壁g墅修笪纯丛麦亘盟夏龌盛红维细胞生物堂堑趁趁髭喧论文评阅人：答辩委员会成员：王煌主塾援武这太堂旦膣医堂院挞堑壬数援植趔旦膣医院王鏖裹副麴援湿趟医堂院附属旦膣医瞳温州医学院硕士学位论文目录中英文缩略对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4前‘言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、16分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46温州医学院硕士学位论文缩写TiRGDHGFCDIDMEMPBSDMSOCCK8DIABBSAFITCASPFAK英文全称titanium中英文缩略对照表Arg··Gly··Asphumang

3、ingivalfibroblasts1，l’一carbonyldiimidazoledulbecco’SmodifiedeaglemediumPhosphateBufferedSalinedimethylsulfoxideCellCountingKitDiaminobenzidineAlbuminfrombovineserumfluoresceinisothiocyanateabsorbantestreptavidin·perosidaseFocalAdhesionKinase中文名称钛片精氨酸一甘氨酸一天冬氨酸人牙龈成纤维细胞羰基二咪唑DMEM培养基磷酸盐缓冲液二甲基亚砜CCK8试剂盒二氨基

4、联苯胺牛血清白蛋白异硫氰酸荧光素吸光度链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结法局部粘着斑激酶温州医学院硕士学位论文不同浓度RGD修饰纯钛表面对牙龈成纤维细胞生物学行为的影响中文摘要经过几十年的发展，口腔种植现已成为修复牙列缺损和牙列缺失的常规方法，但仍然面临着很多挑战，比如由于种植体与周围粘膜等软组织结合不良导致的种植体周围炎。国内外很多学者提出通过对种植体表面改性来增强种植体和软组织的结合，将粘附蛋白、多肽、生长因子固定在种植体的表面，增加牙龈成纤维细胞在种植体表面的粘附增殖，进而提高种植成功率。虽然这些方法对促进种植体．软组织结合起到了非常重要的作用，但是也由于稳定性、生物活性、费用等问题导致

5、它们的临床应用受到一定限制。精氨酸．甘氨酸．天冬氨酸(Arg．Gly．Asp，RGD)广泛存在于多种细胞外基质蛋白(比如：玻连蛋白、纤维蛋白、胶原、层粘连蛋白、骨桥蛋白、骨涎蛋白等)中，被认为是目前应用最广泛、最有效的促粘附多肽。RGD在成骨细胞、成纤维细胞和内皮细胞中的生物活性已经得到了很好的证明，但是对原代培养的人牙龈成纤维细胞的影响研究较少。RGD的生物活性跟其浓度有关，但对于RGD促进细胞粘附的最佳浓度，国内外尚无定论。本研究旨在研究不同浓度的RGD对体外培养的牙龈成纤维细胞生物学行为的影响。【目的】应用羰基二咪唑(1，1'-carbonyldiimidazole，CDI)将RGD短肽

6、化学连接到纯钛表面，观察人牙龈成纤维细胞(humangingivalfibroblasts，HGF)在组装了不同浓度RGD的钛片上的粘附、增殖和铺展情况。【方法】1、采用酶消化组织块法(翻瓶法)进行人牙龈成纤维细胞的原代培养，反复贴壁法和酶消化方法进行细胞纯化。取第4代细胞，采用免疫组化SP法鉴定细胞来源，血球板计数法描绘生长曲线。2、将直径20mm、厚度lmm的圆形钛片，表面经金相砂纸逐级打磨(280#-3000#)，方向一致，经双蒸水、无水乙醇、丙酮、双蒸水分别超声清洗15分钟，去离子水漂洗，高温高压消毒。用CDI将不同浓度的RGD共价连接到钛片上。温州医学院硕士学位论文3、将HGFs在不

7、同浓度的RGD．钛片上分别培养3小时、24小时，倒置荧光显微镜下观察细胞形态、细胞骨架，使用Image．ProPlus软件测量细胞的铺展面积和形状学系数。4、将细胞在不同浓度的RGD．钛片上分别培养1小时、3小时、12小时、24小时、48小时和72小时后，中止培养，加入400ul含10％的CCK8溶液，继续培养3小时，测定450nm波长时的吸光度值，以测定细胞的粘附和增殖。【结果】1、组织块贴壁5