nutlin-3a诱导的p73α对结肠癌细胞周期阻滞的作用及其作用机制

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4、表达及功能的影响，探讨由此产生的对结肠癌细胞老化和静止的作用及其作用机制，为Nutlin．3a用于p53突变及p53缺失的结肠癌的治疗、减少此癌复发的可能性提供实验依据。方法：人体结肠癌细胞株Caco．2(p53基因突变，含野生型p73a基因)，用10％胎牛血清DMEM培养基培养于5％C02-370C的潮湿环境中24h。用含0斗M、2．51xM、5州、10“M、200M、40肛M、600M及80“M的Nutlin．3a培养液培养Caco．2细胞72h后，用MTT法检测Nutlin-3a对Caco．2细胞的抑制作用；WesternBlot检测p

5、73a蛋白在Caco．2细胞中的表达；SA．B．gal染色标识出老化的Caco．2细胞；细胞集落形成分析检测Caco．2细胞在Nutlin．3a撤药后是否重新增殖。寻找一个浓度范围的Nutlin．3a所诱导的p73a能引起癌细胞死亡(凋亡及有丝分裂死亡)及老化，但不引起癌细胞静止，而使肿瘤在化疗药物撤除后复发的可能性减少，并探索Nutlin．3a引起上述结果的作用机制。结果：Nutlin．3a能抑制Caco．2细胞的生长；Nutlin．3a可以上调p73a蛋白在Caco．2细胞中的表达，且有浓度依赖效应；Nutlin．3a引起结肠癌老化但不引

6、起其静止的最佳浓度范围是5．10btM。结论：Nutlin．3a可以使P73a蛋白在Caco．2细胞中的表达加强，且有浓度依赖效应。当Nutlin．3a的浓度为5．10“M时，Nutlm．3a对结肠癌细胞Caco．2的抗肿瘤效应最好。关键词：结肠癌；Nutlin一3a；p73a；细胞老化；细胞静止IIAbstractABSTRACTPurpose：ThisprojectistosearchforasuctableNutlin．3aconcentrationwhichcausescancercelltosenescencebutnottoqui

7、escence．Thatprovidedexperimentalbasisforp53mutationsandp53nullcoloncancerwhichtreatedbyNutlin．3aandreducingthepossibilitytothecarcinomarecurrence．Methods：Caco-2，p53mutationsbutcontentsmt-p73awasfirstacclimatedinDMEMcontaining10％fetalbovineserumfor24hbeforeexposuretoNutlin．3

8、．wetreatredCaco。2cellwith0州、2．51xM、51xM、10rtM、201xM、40州、60-tMand80I．tMofNutlin-3a．ThentestedtheinhibitoryeffectsofNutlin．3aoncelllinesCaco．2byMTTassay，testedp730texperienceofthetreatedCaco．2cellsbywesternblottinganddemonstratedthesenescencecellbySA-betagaldyeingtoanalysiswi

9、thcoloncancereellafter72hours．WesearchedforaconcentrationrangeofNutlin．3a．Nutlin-3