cecropina-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响

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1、分类号：R4单位代码：10752密级：公开学号：2010148宁夏医科大学硕士研究生学位论文CecropinA-thanatin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响TheCecropinA-thanatinhybridpeptideimpactonthemicegrowthperformanceandimmunefunction学位申请人：孙惠敏指导教师：王秀青副教授申请学位门类级别：医学专业名称：临床检验诊断学研究方向：病原微生物与免疫所在学院：检验学院论文完成日期：二0一三年四月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMed

2、icalUniversityThesisforApplicationofMaster’sDegreeManufactureofCombinantAntibacterialPeptidesfromGeneEngineeringanditsAntibacterialActivityAnalysisStudent’sName:SunHuiminSupervisor：WangXiuqingAssociateProfessorSubjectCategory:MedicineMajor:ClinicalLaboratoryDiagnos

3、ticsSpecialty:MicrobiologyandImmunology,School:ClinicalLaboratoryCollegeCompletionDate:Apr.2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文

4、作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要CecropinA-than

5、atin杂合肽对小鼠生长性能及免疫功能的影响摘要目的本研究测定了课题组前期合成、表达的CecropinA-thanatin杂合肽对临床分离的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌的体外抑菌活性，并通过动物实验，对该杂合肽不同剂量、不同给药途径对小鼠生长性能及免疫功能的影响进行研究和探讨，为该基因工程抗菌肽的临床应用奠定了基础。方法1以课题组人工设计合成的CecropinA-thanatin杂合肽为研究对象，进行大规模的蛋白表达，对不同批次的表达产物进行混合后测定混合液的MIC，并对临床分离的革兰氏阳性菌（金葡菌）和革兰氏阳性菌阴性菌（大

6、肠杆菌）进行体外抑菌活性的测定；2选择3－4周龄、近交系BALB/c小鼠，进行分组、称重；处理因素分别为高、中、低剂量灌胃抗菌肽，中剂量腹腔注射抗菌肽，中剂量灌胃庆大霉素，空白对照组灌胃pPICZαA空载体转化酵母的上清，各处理方法连续处理4周；4周后脱臼处死小鼠，称量体重、脾脏、胸腺；3腹腔注射2%SRBC免疫小鼠，脱臼处死小鼠后取脾进行脾淋巴增值试验、抗体细胞生成试验；4提前一小时注射5%鸡红细胞，脱臼处死小鼠后吸取腹腔渗出液涂片镜检，油镜下计算巨噬细胞吞噬率、巨噬细胞吞噬指数；5摘眼球取血后收集血清，ELISA试验检测

7、血清中的TNF-α含量；收集小鼠的肠组织标本，进行荧光定量PCR试验检测空肠组织中的TNF-α含量。结果1大规模表达了CecropinA-thanatin杂合肽，经测定杂合肽混合液的MIC为0.45×-310mol/L，经体外抑菌活性测定，CecropinA-thanatin杂合肽对革兰阳性菌(金葡菌)和IV宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要革兰氏阴性菌(大肠杆菌)均具有明显的抑菌活性；2在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的体重增长率有差别，高剂量CecropinA-thanatin杂合肽灌胃组小鼠的生长性能明显

8、优于其他组小鼠的生长性能；3检测各组小鼠的免疫器官指数，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠之间的脾脏指数、胸腺指数有差别，灌胃高剂量CecropinA-thanatin杂合肽可以显著提高小鼠的脾脏指数、胸腺指数；4检测各组小鼠的脾淋巴细胞增殖能力，在不同处理因素的作用下，4周后各组小鼠