免疫负调控基因a20在人原发性肝癌中的表达状态和所起作用的研究

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1、分类号：R392密级：单位代码：10422学号：201013113∥菇办孑硕士学位论文论文题目：免疫负调控基因A20在人原发性肝癌中的表达状态和所起作用的研究THEEXPRESSIONANDROLEOFNEGArTIVEIMMUNoREGULAToRYGENEA20INHUMANHEPATOCELLUARCARCINoMA作者姓名学院名称专业名称指导教师合作导师邢巧玲医学院免疫学石永玉副教授2013年5月10日原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。

2、对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式注明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：驻关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)—1、．论文作者签名：砰匹毪导师签名：幺孟皇!日期：趔≥，史监．目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5符号说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．10正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．12一肝细胞肝癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12二免疫负调控基因A20⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12三NF．r,B和肝癌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．14四EMT和基质金属蛋白酶M

4、MP9⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15材料和方法一实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18二实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l1．试剂的配置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．免疫组化检测A20在肝癌病人病理切片中的表达情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．233．A20真核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．234．RT-PCR和Western．blot检测SMMC．7721肝癌细胞转染A20质粒后在mRNA和蛋白水平上的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯

5、⋯．265．细胞划痕实验检测A20对BEL．7402细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯326．Transwell实验检测A20对BEL．7402细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．327．细胞侵袭实验检测A20对BEL．7402细胞侵袭能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．328．CCK8实验检测A20对肝癌细胞增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯339．克隆形成实验检测A20对肝癌细胞增殖的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3310．RT-PCR方法检测SMMC．7721细胞转染A20真核表达载体后E．cadherin和MMP9在mRNA水平上的表达变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3

6、4结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．351．A20在肝癌组织中的表达显著低于肝癌旁组织⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．352．A20真核表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．353．细胞划痕实验检测A20对SMMC．7721细胞迁移可能具有抑制趋势⋯⋯⋯．364．Transwell实验和细胞侵袭实验检测A20对BEL一7402细胞迁移和侵袭具有抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．365．CCK8实验检测A20对肝癌细胞的增殖可能具有抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．366．克隆形成实验检测A20对肝癌细胞

7、的增殖有抑制作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯377．SMMC一7721细胞转染A20质粒后，在mRNA水平上E．cadherin的表达没有变化、MMP9的表达下降⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．37讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38附表图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯