抑制黄曲霉毒素的深海细菌发酵及活性物质特性研究

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1、硕士学位论文抑制黄曲霉毒素的深海细菌发酵及活性物质特性研究FERMENTATIONOFAFLATOXIN-INHIBITINGDEEP-SEABACTERIAANDCHARACTERIZATIONOFBIOACTIVEMETABOLITES王文威哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q939学校代码：10213国际图书分类号：579密级：公开理学硕士学位论文抑制黄曲霉毒素的深海细菌发酵及活性物质特性研究硕士研究生：王文威导师：闫培生教授申请学位：理学硕士学科：微生物学所在单位：海洋科学与技术学院答辩日期：2015年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学Cla

2、ssifiedIndex:TU398U.D.C:624DissertationfortheMasterDegreeinScienceFERMENTATIONOFAFLATOXIN-INHIBITINGDEEP-SEABACTERIAANDCHARACTERIZATIONOFBIOACTIVEMETABOLITESCandidate：WangWenweiSupervisor：Prof.YanPeishengAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScienceSpeciality：MicrobiologyAffiliation：Sch

3、oolofMarineScienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要深海是一个人类很少涉足的区域，里面蕴藏极其丰富的微生物资源，目前，开发海洋资源越来越受人类重视。随着越来越多的农作物或动物饲料受到包括黄曲霉毒素在内的真菌毒素的污染，从深海环境中寻找到可靠的能够抑制黄曲霉毒素的微生物，是一种很有前景的生物防治方法。本论文主要探寻深海细菌发酵条件优化来获取活性物质，以寻求高效

4、、环保的去除黄曲霉毒素的生物方法。以本实验室前期利用可视化平板法初筛得到的具有抑菌抑毒活性的149株深海细菌，通过Tip-culture方法复筛出44株高活性的抑制黄曲霉毒素的深海细菌，约占菌株总数的29.50%，这些细菌的抑毒率都在80%以上，其中完全抑制黄曲霉毒素的有14株，约占菌株总数的9.40%，约占高活性菌株总数的31.80%。其中有79株菌发酵液的pH值为偏碱性（pH8-9），占菌株总数的53.02%，有26株菌的发酵液偏中性（pH7左右），约占菌株总数的17.45%，有44株菌的发酵液为偏酸性，约占菌株总数的29.53%。对复筛得到的部分高活性

5、菌株进行A1、淀粉酪蛋白、PDA、ISP2、高氏一号等5种发酵培养基的筛选，得到了各自最适宜的发酵培养基。利用均匀设计法对FA13菌株进行了发酵环境因素和营养成分的优化研究，并通过验证实验，最终确定其最优组合是：酵母粉9.3690g/L，麦芽膏2.0820g/L,葡萄糖13.8060g/L，接种量1.0610%，培养温度21℃，培养时间10d，pH值6.2，此方案发酵液的抑菌率是优化前的7.2倍，抑毒率是优化前的1.6倍。本论文对高活性菌株FA13、ZL3、13-1T等菌株发酵液中活性物质的温度稳定性、酸碱稳定性、酶解稳定性等特性进行了研究，结果表明：菌株F

6、A13的ISP2发酵液对温度、酸碱、酶解都很稳定，而ZL3的淀粉酪蛋白发酵液对温度、酸碱、酶解都不稳定，菌株13-1T的ISP2发酵液对温度、酸碱稳定，而对酶解不稳定，菌株FA13的淀粉酪蛋白发酵液对温度、酶解很稳定，但在强碱环境下几乎没有抑菌抑毒效果。另外，对菌株FA13的淀粉酪蛋白和ISP2发酵液进行了保藏时间稳定性实验，结果表明在室温下储藏6个月后，其抑菌抑毒率没有发生变化。利用正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚等四种有机溶剂对FA13菌株优化发酵条件下的发酵液中的活性物质进行萃取和抑菌抑毒活性检测，结果表明：正丁醇提取物的抑制效果最好，乙酸乙酯提取效果最

7、差。关键词：深海细菌；黄曲霉毒素；深海；活性物质；发酵-I-哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractThedeep-seaarea,anareainwhichhumansrarelygetinvolved,containsextremelyrichmicrobialresources.Nowadays,exploitationofoceanresourcesbecomesincreasinglyimportant.Asmoreandmorecropsandanimalsarebeingcontaminatedbymycotoxin,suchasafla

8、toxin,itmightbeapromisingb